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公开(公告)号：CN101838626B
公开(公告)日：2012-05-16
申请号：CN201010169293.8
申请日：2010-05-12
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物学技术领域的巴尔通氏体固液双相斜面培养基及其制备和应用方法，包括：由牛肉浸出液、淀粉、氯化钠、琼脂、脱纤维绵羊血和蒸馏水组成的斜面固体培养基以及酪蛋白胰酶水解物、大豆木瓜蛋白酶水解物、葡萄糖、氯化钠、磷酸二钾和蒸馏水组成的液体培养基。本发明制备得到的巴尔通氏体固液双相斜面培养基中达到107CFU/ml约需48小时，其生长数度提高2.5倍，成本节约500倍(血平板培养约需5天，达到107CFU需100个平皿)，弥补了目前巴尔通氏体体外培养方法细菌生长缓慢、费时费力、成本高等缺陷。
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公开(公告)号：CN101948928A
公开(公告)日：2011-01-19
申请号：CN201010511965.9
申请日：2010-10-19
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪链球菌2型GDH基因的荧光定量PCR检测方法，根据猪链球菌的GDH基因的序列，设计一对特异性引物F1、R1和TaqMan探针，探针5′端标记的荧光报告基团为FAM，3′端标记的淬灭基团为Eclipse，扩增目的片断长度为81bp；将含有目的基因的片段克隆到pMD18-T载体中，转化到JM109感受态细胞，挑取阳性克隆鉴定；提取阳性质粒，用分光光度计测定OD260nm值，并将质粒浓度换算成拷贝数/μl，质粒标准品10倍梯度稀释作为模板，在荧光定量PCR仪上检测，得出标准曲线；采集猪血液并提取血液全基因组DNA，采用已建立的荧光定量PCR方法，根据标准曲线计算出待检样品中猪链球菌含量；本发明可以实时定量检测血液中细菌含量，灵敏度高、特异性强、重复性好，易于推广应用。
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公开(公告)号：CN101812518A
公开(公告)日：2010-08-25
申请号：CN201010119005.8
申请日：2010-03-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪链球菌毒力因子的多重PCR检测试剂盒及其检测方法；该试剂盒包含碱基序列如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：20所示的核酸；该试剂盒的检测方法包括如下步骤：步骤一，提供待测样品的DNA；步骤二，取试剂盒，采用常规PCR方法扩增待测样品的DNA，采用琼脂糖凝胶电泳法检测扩增结果，根据结果进行判定；所述判断具体为，以猪链球菌2型阳性DNA作为对照，若对照未扩增出全部条带，则重新检测；若对照扩增出全部条带，则进行结果判定。本发明所建立的多重PCR检测方法特异、灵敏，且具有简便快捷的优点；试剂盒稳定性可靠，能用于临床样品的快速检测及猪链球菌的分子流行病学调查研究。
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公开(公告)号：CN103866050A
公开(公告)日：2014-06-18
申请号：CN201410146551.9
申请日：2014-04-14
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR检测方法及其引物，通过PCR扩增、克隆获得阳性重组质粒，然后以已知浓度的目的基因作为模板进行荧光定量PCR反应，作出标准曲线图以及标准曲线，用于测算出待测样品中的病毒含量；通过样品检测结果与标准曲线对比，确定样品中试剂的目的基因拷贝数，同时也可以作为实验室检测PEDV增殖曲线的一种手段。该方法适用于病毒样品的临床检测，检测只需在2小时内即可完成，大大缩短了检测时间，能为我国PEDV疫情的防控起到很好的应用作用。
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公开(公告)号：CN101838626A
公开(公告)日：2010-09-22
申请号：CN201010169293.8
申请日：2010-05-12
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物学技术领域的巴尔通氏体固液双相斜面培养基及其制备和应用方法，包括：由牛肉浸出液、淀粉、氯化钠、琼脂、脱纤维绵羊血和蒸馏水组成的斜面固体培养基以及酪蛋白胰酶水解物、大豆木瓜蛋白酶水解物、葡萄糖、氯化钠、磷酸二钾和蒸馏水组成的液体培养基。本发明制备得到的巴尔通氏体固液双相斜面培养基中达到107CFU/ml约需48小时，其生长数度提高2.5倍，成本节约500倍(血平板培养约需5天，达到107CFU需100个平皿)，弥补了目前巴尔通氏体体外培养方法细菌生长缓慢、费时费力、成本高等缺陷。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN101288774A
公开(公告)日：2008-10-22
申请号：CN200710047952.9
申请日：2007-11-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪附红细胞体的SPF小鼠感染模型的构建方法。包括步骤：(1)猪附红细胞体的分离纯化；(2)SPF小鼠饲养于熏蒸消毒的隔离室中；(3)接种；(4)动物模型检测评估。本发明成功构建了猪附红细胞体的SPF小鼠感染模型，并通过鲜血压片检测，PCR检测和透射电镜检测三种方法验证。本模型可用于附红细胞体病的病原学，致病力，病理学和免疫学等方面的深入研究。
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公开(公告)号：CN102154516A
公开(公告)日：2011-08-17
申请号：CN201110068834.2
申请日：2011-03-22
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪传染性胃肠炎病毒S基因荧光定量PCR检测方法及其引物。PCR扩增目的片段，鉴定为阳性的PCR产物，克隆到pMD18-T载体并转化到DH5α感受态细胞，蓝白斑筛选挑取阳性克隆，并进行测序鉴定。提取阳性重组质粒，用紫外分光光度计定量，标准品系列以10倍梯度稀释为终浓度在1.0×103-1.0×1011拷贝/mL，以其作为模板进行荧光定量PCR反应，建立荧光定量PCR标准曲线。提取临床粪便样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR，根据其结果和标准曲线计算样品中病毒的含量。所述的引物序列为序列1和序列2。本发明的优点无需另外设计荧光探针，降低成本，操作简便，检测只需在2小时内即可完成，并且适用任何一款荧光定量PCR仪，可应用于规模大、通量高的样本检测中。
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公开(公告)号：CN101701033A
公开(公告)日：2010-05-05
申请号：CN200910309580.1
申请日：2009-11-12
Applicant: 上海交通大学
IPC: C07K14/29 , C07K1/14 , C07K16/12 , G01N33/531
Abstract: 一种免疫技术领域的猪附红细胞体抗原、抗体、样品的制备方法，其中，抗原的制备方法，包括如下步骤：取感染附红细胞体的猪血，制备红细胞泥；PBS悬浮红细胞泥，水浴，离心，取上清；滤膜过滤上清，得滤液，之后超速离心得沉淀，PBS重悬，裂解，离心得上清，即猪附红细胞体抗原；抗体的制备方法，包括如下步骤：取猪附红细胞体抗原，制备血清；将血清与健康猪血红细胞泥混合，孵育，离心，取上清，纯化上清，得IgG抗体；样品的制备方法，包括如下步骤：取待检的猪血液，制备得红细胞泥；用预冷PBS洗涤红细胞泥，生理盐水悬浮，加Tris-Hcl裂解，超速离心，PBS悬浮沉淀，得样品。在本发明的基础上，可方便地应用双抗夹心ELISA法检测猪附红细胞体。
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公开(公告)号：CN103866050B
公开(公告)日：2016-08-17
申请号：CN201410146551.9
申请日：2014-04-14
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪流行性腹泻病毒荧光定量PCR检测方法及其引物，通过PCR扩增、克隆获得阳性重组质粒，然后以已知浓度的目的基因作为模板进行荧光定量PCR反应，作出标准曲线图以及标准曲线，用于测算出待测样品中的病毒含量；通过样品检测结果与标准曲线对比，确定样品中试剂的目的基因拷贝数，同时也可以作为实验室检测PEDV增殖曲线的一种手段。该方法适用于病毒样品的临床检测，检测只需在2小时内即可完成，大大缩短了检测时间，能为我国PEDV疫情的防控起到很好的应用作用。
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公开(公告)号：CN102154516B
公开(公告)日：2013-05-01
申请号：CN201110068834.2
申请日：2011-03-22
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 一种生物技术领域的猪传染性胃肠炎病毒S基因荧光定量PCR检测方法及其引物。PCR扩增目的片段，鉴定为阳性的PCR产物，克隆到pMD18-T载体并转化到DH5α感受态细胞，蓝白斑筛选挑取阳性克隆，并进行测序鉴定。提取阳性重组质粒，用紫外分光光度计定量，标准品系列以10倍梯度稀释为终浓度在1.0×103-1.0×1011拷贝/mL，以其作为模板进行荧光定量PCR反应，建立荧光定量PCR标准曲线。提取临床粪便样品的病毒RNA，进行荧光定量PCR，根据其结果和标准曲线计算样品中病毒的含量。所述的引物序列为序列1和序列2。本发明的优点无需另外设计荧光探针，降低成本，操作简便，检测只需在2小时内即可完成，并且适用任何一款荧光定量PCR仪，可应用于规模大、通量高的样本检测中。
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