一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途

    公开(公告)号:CN111171145B

    公开(公告)日:2021-11-05

    申请号:CN202010068925.5

    申请日:2020-01-21

    Abstract: 本发明涉及医学生物抗体技术领域,提供了一种抗狂犬病病毒单克隆抗体、制备方法及用途。该单克隆抗体的轻链可变结构域包含高变区CDR1、CDR2、CDR3,氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1~3所示;重链可变结构域包含高变区CDR1'、CDR2'、CDR3',氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4~6所示。经检测,该单克隆抗体具有高体外中和活性、高中和指数,抗原表位靠近狂犬病病毒糖蛋白中和II表位或与位于中和II表位内,其针对的关键氨基酸位点一个为aa205,另一个由37、194和204位氨基酸共同构成,对街毒株有很好的中和能力;此外,其Tm值为70.58℃,具有较好的热稳定性,提示有可能作为抗狂犬病病毒被动免疫制剂产品或开发体外诊断试剂盒。

    基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用

    公开(公告)号:CN113567670A

    公开(公告)日:2021-10-29

    申请号:CN202110913165.8

    申请日:2021-08-10

    Abstract: 本发明涉及病毒检测技术领域,具体涉及一种基于RSV F蛋白融合前特异性抗体的双抗体夹心ELISA方法及应用,该双抗体夹心ELISA方法可以更为准确地检测RSV病毒滴度,同时提供直观数据,其分别选择融合前特异性抗体AM14作为包被抗体,选择D25作为检测抗体,包被抗体浓度为1000ng/孔,检测抗体稀释比例为1:3000。本发明建立的双抗体夹心ELISA方法与人轮状病毒、人3型副流感病毒以及牛血清均无交叉反应,特异性良好。本发明用该方法对不同稀释倍数的RSV病毒进行多次重复试验,结果证明该方法CV<10%。本发明重复性、广谱性、灵敏度良好,具有易操作,周期短的特点。

    从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法及筛选试剂盒

    公开(公告)号:CN110655571B

    公开(公告)日:2021-07-02

    申请号:CN201910916834.X

    申请日:2019-09-26

    Abstract: 本发明涉及生物医药工程技术领域,公开了一种从噬菌体抗体库中筛选和验证抗狂犬病病毒中和抗体的方法,包括A、单克隆噬菌体抗体培养,并取培养上清液;B、定性分析:将步骤A中的培养上清液置于96孔板中,依次经DMEM培养基以及中和用病毒中和、BSR细胞悬液培养、预冷丙酮固定后,与稀释后的FITC标记的抗狂犬病病毒核蛋白抗体共孵育,选择可明显抑制病毒感染的克隆测序,排除重复的序列,初步获得中和活性各不相同的抗狂犬病病毒抗体序列;C、定量分析:挑选不同序列有中和活性的各个克隆,重新制备噬菌体抗体颗粒,纯化并稀释一定倍数后采用RFFIT法测定体外中和活性;以及D、全分子抗体瞬时表达和活性分析。

    人呼吸道合胞病毒毒株、应用、抗体或杂交瘤细胞或抗血清

    公开(公告)号:CN111073861A

    公开(公告)日:2020-04-28

    申请号:CN201811223029.0

    申请日:2018-10-19

    Abstract: 本发明涉及一种呼吸道合胞病毒(HRSV)毒株、应用、抗体或杂交瘤细胞或抗血清。本发明所述的人呼吸道合胞病毒毒株为B亚型毒株,并且其保藏编号为CCTCC NO:V201821。本发明所提供的病毒株具有如下优点:在体外细胞中增殖水平高、遗传稳定性好,免疫动物后,免疫原性强,对A亚型标准株有较好的交叉反应性和中和活性;此毒株可进一步用于RSV减毒活疫苗和组分疫苗的开发,还可以用于抗RSV抗体的制备,并且可用作攻毒用病毒株,从而用于疫苗保护率的评价以及RSV病毒感染机制的研究和感染动物模型的建立。

    一种抗狂犬病病毒特异性人源抗体及应用

    公开(公告)号:CN104193823B

    公开(公告)日:2019-06-11

    申请号:CN201410417957.6

    申请日:2014-08-22

    Abstract: 本发明的目的是提供一种抗狂犬病毒的中和性抗体,尤其是人源化或全人源单克隆抗体,以满足临床上诊断和/或治疗狂犬病的需要。本发明采用噬菌体抗体库技术,以接种过狂犬病疫苗的32份高效价的健康人外周血为原材料,制备噬菌体抗体库。该抗体库通过三轮筛选,获得7株ELISA阳性抗体。进一步通过RFFIT方法测定其中和活性,其中的R5、R7、R8、R9共四株具有较强的中和活性。本发明的具有高亲和力的人源化的抗狂犬病病毒抗体,可用于替代ERIG和HRIG,对于狂犬病毒严重暴露者进行主动和/或被动免疫治疗。

    一种筛选病毒毒种的方法

    公开(公告)号:CN104109654A

    公开(公告)日:2014-10-22

    申请号:CN201410341791.4

    申请日:2014-07-17

    Inventor: 李薇 李建强 陈军

    CPC classification number: Y02A50/53 Y02A50/60

    Abstract: 本发明提供了一种筛选用于制备疫苗的病毒毒种的方法,包括:(a)提供一培养细胞;(b)将待筛选的病毒毒种与所述培养细胞相接触一定时间;(c)对在步骤(b)中接触过所述待筛选的病毒毒种的培养细胞,通过蚀斑克隆法分离出不同的病毒克隆,筛选出适于制备疫苗的第一轮病毒毒种,该方法还包括:(d)用在步骤(c)中收获的第一轮病毒毒种,重复步骤(a)-(c),筛选出适于制备疫苗的第二轮病毒毒种,(e)用在步骤(d)中收获的第二轮病毒毒种系列稀释,获得一系列病毒浓度递减的稀释物,(f)将步骤(e)中的每一份稀释物与培养细胞相接触一定时间,(g)取步骤(f)中最高倍稀释物的病变病毒克隆,继续培养,筛选出适于制备疫苗的第三轮病毒毒种。

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