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公开(公告)号：CN110331129A
公开(公告)日：2019-10-15
申请号：CN201910551211.7
申请日：2019-06-24
Applicant: 西北农林科技大学
Abstract: 本发明公开了一种牛的胚胎移植液及其使用方法，牛的胚胎移植液包括SOF基础培养基，还包括以下添加剂：4-羟乙基哌嗪乙磺酸、碳酸氢钠、胰岛素-转铁蛋白-硒添加剂、β-巯基乙醇、亚牛磺酸、1-油酰基-sn-甘油-3-磷酸钠盐、L-瓜氨酸和红景天苷。采用本发明的胚胎移植液可有效提高牛胚胎移植后的怀孕率。
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公开(公告)号：CN108103011A
公开(公告)日：2018-06-01
申请号：CN201810134698.4
申请日：2018-02-09
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N5/075
CPC classification number: C12N5/0609 , C12N2500/25 , C12N2501/11 , C12N2501/115 , C12N2501/21 , C12N2501/31 , C12N2501/392
Abstract: 本发明提供一种牛卵母细胞体外成熟培养液及培养方法，成熟培养液包括10％的胎牛血清和1％的ITS‑G，并含有0.075IU/mL的HMG、1μg/mL的17β‑雌二醇、10ng/mL的EGF、2.2mg/mL的bFGF和50ng/mL的CXCL12。利用上述培养液进行牛卵母细胞体外成熟培养，可以提高牛卵母细胞体外培养的成熟质量、体外受精胚胎发育率和体细胞核移植胚胎发育率和囊胚质量。
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公开(公告)号：CN107988257A
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201711322629.8
申请日：2017-12-12
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/877 , C12N13/00
CPC classification number: C12N15/85 , C12N9/0004 , C12N13/00 , C12N15/8772 , C12N2830/006
Abstract: 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。
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公开(公告)号：CN104293833B
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201410528091.6
申请日：2014-10-09
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的Sp110巨噬细胞特异打靶载体及重组细胞，对牛胎儿成纤维细胞进行基因打靶获得的M‑S位点定点敲入Sp110基因的牛胎儿成纤维细胞。利用打靶载体中的MSR1启动子，使得定点敲入的Sp110在且仅在牛的外周血巨噬细胞中正常转录和表达。本发明利用电穿孔的方法将打靶载体和TALEN位点特异性核酸切割酶表达载体共转染牛胎儿成纤维细胞，通过PCR和Southern Blotting筛选和验证获得了打靶的阳性克隆细胞。以该阳性克隆细胞为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚胎。将转基因克隆胚胎移植到发情的受体牛子宫中，最终生产成活的转基因克隆牛。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN103820494B
公开(公告)日：2016-03-02
申请号：CN201410073055.5
申请日：2014-02-28
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可去除随机整合的位点特异性整合载体及其构建方法和应用，包括pUC ori、attB序列和多克隆位点MCS，在attB序列上下游分别设有第一loxP序列和第一rox序列，CMV启动子连接在第一loxP序列的上游，负筛选基因与第一rox序列相连接，负筛选基因下游还连接有内核糖体结合位点IRES2，IRES2下游为荧光标记基因，荧光标记基因下游为MCS，MCS上下游分别设有第二rox序列和第二loxP序列，并且分别与第一rox序列和第一loxP序列方向相同，MCS下游为正筛选元件。本发明为在细胞筛选中提供剔除随机整合重组细胞而直接筛选出假attP位点特异整合的重组细胞的新的应用。
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公开(公告)号：CN103820494A
公开(公告)日：2014-05-28
申请号：CN201410073055.5
申请日：2014-02-28
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种可去除随机整合的位点特异性整合载体及其构建方法和应用，包括pUC？ori、attB序列和多克隆位点MCS，在attB序列上下游分别设有第一loxP序列和第一rox序列，CMV启动子连接在第一loxP序列的上游，负筛选基因与第一rox序列相连接，负筛选基因下游还连接有内核糖体结合位点IRES2，IRES2下游为荧光标记基因，荧光标记基因下游为MCS，MCS上下游分别设有第二rox序列和第二loxP序列，并且分别与第一rox序列和第一loxP序列方向相同，MCS下游为正筛选元件。本发明为在细胞筛选中提供剔除随机整合重组细胞而直接筛选出假attP位点特异整合的重组细胞的新的应用。
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公开(公告)号：CN102321655B
公开(公告)日：2013-08-28
申请号：CN201110259942.8
申请日：2011-09-05
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/63
Abstract: 本发明公开了一种基于假attP位点整合的通用型表达载体及其构建方法和应用，该表达载体包括attB序列、pUC ori和多克隆位点MCS，CMV组成型启动子与attB序列相连接，CMV组成型启动子下游插入两个同向的LoxP元件，在LoxP元件下游设有第一荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子，在两个LoxP元件之间设有第二荧光指示蛋白开放阅读框及其终止子和抗生素表达元件。该载体可应用于筛选稳定表达荧光标记蛋白的无抗生素筛选标记的重组细胞。
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公开(公告)号：CN102807993A
公开(公告)日：2012-12-05
申请号：CN201210319587.3
申请日：2012-08-31
Applicant: 西北农林科技大学 , 杨凌科元克隆股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N5/10 , C12N15/873
Abstract: 本发明公开了一种骨骼肌特异性的靶向Myostatin基因的miRNA表达载体及重组细胞，首先构建含有靶向Myostatin基因的pre-miRNA和MYL1基因启动子的骨骼肌特异性miRNA表达载体pmiR-MNM2，然后通过电转染法将外源性表达载体pmiR-MNM2导入红安格斯新生牛成纤维细胞并经G418筛选获得阳性细胞，进行PCR鉴定，证实目的基因整合到牛胎儿成纤维细胞的基因组；将转染pmiR-MNM2的牛胎儿成纤维细胞作为核供体移入牛去核卵母细胞，获得转基因克隆胚，将这些胚胎移入受体牛的子宫，为生产具有双肌性状的红安格斯克隆牛奠定了坚实的基础。
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公开(公告)号：CN102296090A
公开(公告)日：2011-12-28
申请号：CN201110249842.7
申请日：2011-08-29
Applicant: 西北农林科技大学
IPC: C12N15/877
Abstract: 本发明公开了一种基于体细胞核移植构建的牛体细胞克隆胚的处理方法，将待移植的牛体细胞注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，在电融合之后1h，挑选成功融合的牛体细胞克隆胚用1μM的Oxamflatin处理牛体细胞克隆胚胎12h，可以显著提高牛体细胞克隆囊胚的发育率和质量，可高效体外生产牛体细胞克隆胚胎。
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