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公开(公告)号：CN118652836B
公开(公告)日：2025-04-11
申请号：CN202410820667.X
申请日：2024-06-24
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了三丁酸甘油酯作为胚胎体外发育培养液添加剂的用途，属于动物生殖生物学技术领域。本发明首次将三丁酸甘油酯作为添加剂应用于鼠胚胎体外发育培养液，该三丁酸甘油酯能显著提高囊胚率，并且减少胚胎内ROS含量、改善胚胎内线粒体膜电位、提高胚胎内ATP水平及抗氧化基因的表达，改善胚胎内DNA甲基化和组蛋白修饰水平，促进胚胎体外发育；并且三丁酸甘油酯作为天然抗氧化剂和表观药物，安全无毒副作用、价格便宜易获取，在整个发育培养过程中无需更换培养液，操作简单；该三丁酸甘油酯为人类辅助生殖技术的胚胎高效发育、哺乳动物受精胚胎、孤雌胚胎和体细胞克隆胚胎等体外胚胎工程技术均提供了有力支持，应用前景良好。
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公开(公告)号：CN116287004A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310436265.5
申请日：2023-04-21
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明公开了一种成纤维细胞基因转染方法，所述方法包括：获得细胞浓度为1～2个/uL的成纤维细胞悬液，将所述成纤维细胞悬液于细胞培养皿中制备细胞悬液微滴，每个所述细胞悬液微滴由体积为10±0.5uL的所述成纤维细胞悬液形成；将所述含有细胞悬液微滴的细胞培养皿于套皿微环境中孵育，细胞贴壁后加入细胞培养基培养；获得浓度为150～200ng/uL的含有线性化目的基因的质粒溶液；将所述质粒溶液吸入注射针中，调整所述注射针与水平面所成夹角的角度为30～60°，依次向每个所述细胞注射；注射后进行单细胞培养，获得稳定转染的转基因细胞克隆。获得不带筛选标记细胞系的目的，同时能够实现高效率的稳转。
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公开(公告)号：CN115873854A
公开(公告)日：2023-03-31
申请号：CN202210835106.8
申请日：2022-07-15
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N5/10
Abstract: 本发明提供了一种靶向敲除猪MSTN的sgRNA及其单碱基编辑系统与应用，属于基因敲除技术领域，所述sgRNA的核苷酸序列为5′‑GGCACTGGTATTTGGCAGAGC‑3′，所述猪MSTN的sgRNA以第2外显子为打靶区域，能够精准、快速靶向猪MSTN基因，从而能够保证后续猪MSTN基因发生定点突变，达到敲除猪MSTN基因的目的。本发明利用单碱基编辑器在猪MSTN基因第2外显子处成功引入终止密码子，实现定点编辑，为后期生产瘦肉率高的碱基突变猪奠定基础。本发明成功获得了猪MSTN敲除的单克隆细胞，为以后单碱基编辑在大型动物育种上提供了方向，得到的基因缺失单克隆细胞株为动物模型的建立提供了优秀的实验素材，对单碱基编辑猪的培育具有重要意义。
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公开(公告)号：CN114107180A
公开(公告)日：2022-03-01
申请号：CN202111225743.5
申请日：2021-10-21
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明公开了无透明带体细胞克隆1‑细胞期胚胎聚合及体外培养的方法。采用浓度为0.3％的链霉蛋白酶溶液去除重构胚和去核卵母细胞的透明带，两两一组放入含20％牛血清的洗卵液微滴中，用矿物油覆盖约30min，将1‑细胞期的克隆胚和去核卵母细胞，用自制玻璃吸管轻轻转移至电极宽度为1mm的融合槽中1对1排列，再用自制的拨卵针轻轻将2枚卵拨贴在一起，使2枚卵胞质接触切面与电场方向垂直或近似垂直，也就是组成的“8”字卵正直于两侧电极之间，然后进行融合/聚合，将相互融合的胚胎转入自制的“U型”微滴培养体系中进行培养，体细胞克隆胚胎的卵裂率达到95.7％，囊胚发育率达到69.8％，极大改善了体外克隆重构胚的发育潜力。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108004204B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201810072343.7
申请日：2018-01-25
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明提供了一种高通量筛选优质卵母细胞的方法，该方法首先通过成熟液Ⅰ和Ⅱ让卵母细胞在体外培养环境达到成熟，再通过脱卵丘溶液进行脱卵丘细胞，同时对卵母细胞的细胞膜结构的完整性进行初选，半透膜结构不完整的卵母细胞不会出现卵周隙，在此过程中可以淘汰一部分劣质卵母细胞；最后在等渗无激素溶液中复选，如果初选的卵母细胞的细胞膜不能恢复到脱卵丘溶液处理之前的状态，则这种卵母细胞也必须淘汰，从而可快速高通量筛选出优质卵母细胞，用于生产性克隆工作的开展。
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公开(公告)号：CN111926037A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010876990.0
申请日：2020-08-27
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所 , 中国科学院亚热带农业生态研究所 , 湖南惠生农业科技开发股份有限公司
IPC: C12N15/85 , C12N15/66 , C12N15/113 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及分子生物学领域，特别是涉及一种利用双sgRNA技术敲除MSTN基因的质粒及敲除MSTN基因的方法。所述制备方法包括：设计sgRNA寡聚核苷酸链；将sgRNA寡聚核苷酸链通过程序性退火得到含黏性末端的退火后的sgRNA双链；将退火后的sgRNA双链与酶切处理后的PX459-puro载体连接得到PX459-puro-sgRNA质粒。本发明提供的质粒的制备方法简单有效，敲除MSTN基因的方法则可以有效敲除MSTN基因，提高桃源黑猪仔猪的生长速率。
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公开(公告)号：CN105853021B
公开(公告)日：2018-09-14
申请号：CN201610152282.6
申请日：2016-03-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: A61B10/02
Abstract: 本发明涉及一种微型采精设备及其采集方法，适于动物繁殖中使用。本发明的微型采精设备在包括采精管、控温器、集精管、导管、真空泵、节律器，本发明的真空泵、节律器通过导管连接集精管。通过真空泵、节律器模拟雌性动物体内的搏动，通过导管传递真空泵产生的负压到集精管，通过真空泵模拟雌性动物体内的负压，解决了对小型动物采精的难题。本发明操作简单，不损伤动物，且采集速度较快。
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公开(公告)号：CN107328947A
公开(公告)日：2017-11-07
申请号：CN201710728980.0
申请日：2017-08-22
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: G01N35/00 , A23K50/30 , A23K20/158 , A23K10/22 , A23K20/174
CPC classification number: G01N35/00 , A23K10/22 , A23K20/158 , A23K20/174 , A23K50/30
Abstract: 本发明公开了一种转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，涉及转基因猪检测领域。本发明公开的转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物生理功能的评价方法，其包括：检测转fat-1基因猪的血液生理生化指标和尿液生理生化指标。该评价方法可以对转基因猪外源基因整合位置效应和表达产物对转基因猪的生长性能的影响进行准确、可靠地评价，有助于在转fat-1基因猪育种过程中准确控制fat-1基因表达。
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公开(公告)号：CN106086031A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610431774.9
申请日：2016-06-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
CPC classification number: C07K14/495 , C12N15/85 , C12N2800/107 , C12N2800/80
Abstract: 本发明公开了猪基因组中猪肌抑素基因编辑位点及其应用，属于生物技术和生物医学工程领域。本发明从猪肌抑素基因编码区中分离出1个基因编辑靶位点，其序列为5’‑GGCTGTGTAATGCATGTATGTGG‑3’，位于MSTN编码区1号外显子。该位点能被Cas9核酸内切酶特异性识别，从而介导双链断裂，然后和打靶载体发生同源重组，将突变基因或选择性标记基因等整合至受体细胞基因组的预定位点。统计结果表明，该位点打靶效率为80.5％。本发明提供的猪肌抑素基因编辑位点，为对该基因进行精确编辑提供了有效的靶标，为研制高瘦肉率的生猪新品种提供了新策略，也为探明肌抑素的分子机制和信号通路提供了可靠的手段和素材。
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