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公开(公告)号：CN113652385A
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN202110900124.5
申请日：2021-08-06
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N9/10 , C12N9/12 , C12N15/61 , C12N15/55 , C12N15/56 , C12N15/70 , C12P19/00 , C12R1/19
Abstract: 本发明公开了一种高产乳酰‑N‑四糖的微生物的构建方法及应用，属于微生物基因工程领域。本发明以前期构建完成的高效生产前体物质乳酰‑N‑三糖II的菌株为出发菌株，过表达合成乳酰‑N‑四糖的关键基因，使其拥有生产乳酰‑N‑四糖的合成能力。本发明通过筛选高效的β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因，并合理设计在载体pCDFDuet‑1上共表达β‑1,3‑半乳糖基转移酶基因和强化UDP‑半乳糖途径关键基因UDP‑葡萄糖4差向异构酶基因(galE)，从而提高乳酰‑N‑四糖的合成，在摇瓶实验中，大肠杆菌生产乳酰‑N‑四糖的能力为3.04g/L，在3L发酵罐中，乳酰‑N‑四糖的产量达到25.49g/L，具备工业应用的前景。
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公开(公告)号：CN110804577A
公开(公告)日：2020-02-18
申请号：CN201911188891.7
申请日：2019-11-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明提供了一种生产2’-岩藻糖基乳糖的大肠杆菌工程菌株，通过CRISPR/Cas9基因编辑系统，敲除原始菌株2’-岩藻糖基乳糖合成代谢途径中的相关基因；构建模块化代谢通路，通过不同质粒组合调控代谢途径中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)，甘露糖-1-磷酸鸟嘌呤基转移酶(ManC)，GDP-甘露糖-6-脱氢酶(Gmd)，GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)，L-岩藻糖1-激酶/GDP-岩藻糖焦磷酸化酶(Fkp)以及2’-岩藻糖基乳糖合成酶(FucT2)的表达水平，使细胞内能积累更高浓度的2’-岩藻糖基乳糖。本发明还提供了一种高效生产2’-岩藻糖基乳糖的方法。
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公开(公告)号：CN110734889A
公开(公告)日：2020-01-31
申请号：CN201911092950.0
申请日：2019-11-11
Applicant: 江南大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N15/90 , C12N15/61 , C12N15/60 , C12N15/54 , C12N15/53 , C12P19/32 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种高效生产GDP-岩藻糖的大肠杆菌生产菌株，属于基因工程、微生物代谢工程技术领域。本发明以葡萄糖为底物，通过组合调控代谢通路中的磷酸甘露糖变位酶(ManB)、GDP-甘露糖焦磷酸化酶(ManC)、GDP-甘露糖4,6-脱水酶(Gmd)和GDP-岩藻糖合成酶(WcaG)的表达从而缓解GDP-岩藻糖合成通路的代谢压力。本发明还通过CRISPR/Cas9基因编辑系统敲除大肠杆菌中分解GDP-岩藻糖的基因UDP-葡萄糖脂质载体转移酶(WcaJ)以及加强代谢通路中的辅因子的再生进一步提高胞内GDP-岩藻糖的积累。
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公开(公告)号：CN105255772B
公开(公告)日：2019-09-13
申请号：CN201510744603.7
申请日：2015-11-06
Applicant: 江南大学
Abstract: 一株产菊糖果糖转移酶的菌株及其生产菊糖果糖转移酶的方法和应用，属于食品生物技术领域。本发明涉及一株产菊糖果糖转移酶的菌株，分类命名为链霉菌（Streptomyces davawensis）SK 39.001，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2015352。以此链霉菌为出发菌株，以菊糖为碳源，与氮源及无机盐组成发酵培养基，发酵生产菊糖果糖转移酶。发酵培养基以菊糖，硝酸钠为主要碳源和氮源，发酵后经检测，在发酵液中菊糖果糖转移酶酶活达2‑100U/mL。将菊糖果糖转移酶添加到1%‑50%的菊糖溶液中生产双果糖酐I，转化3‑24h，转化率达到75%以上。本发明所得双果糖酐I产品安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性甜味剂。
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公开(公告)号：CN106591271B
公开(公告)日：2019-07-16
申请号：CN201710119423.9
申请日：2017-03-02
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种酶活和温度稳定性提高的精氨酸脱亚胺酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。该精氨酸脱亚胺酶突变体为酶活性中心附近的甘氨酸突变为脯氨酸，即Gly292 Pro。本发明利用定点突变技术对野生型精氨酸脱亚胺酶arcA编码基因进行分子改造，得到了一种突变体酶ADIG292P，相对于野生型精氨酸脱亚胺酶氨基酸序列的第292位甘氨酸突变为脯氨酸。本发明所述的定点突变改造的精氨酸脱亚胺酶与野生酶相比其酶活力提高了1.5倍，在40℃下的半衰期提高了5.43倍，解决了精氨酸脱亚胺酶催化瓜氨酸合成时，催化能力和温度稳定性低的问题，为高效合成瓜氨酸的工业化生产及医药应用奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108949723A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810834320.5
申请日：2018-07-26
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/2402 , C12N15/70 , C12P19/12
Abstract: 本发明公开了一种酶活提高的双果糖酐水解酶突变体C387A，属于基因工程技术领域。首先我们对来源于微生物Arthrobacter chlorophenolicus A6的双果糖酐水解酶(AcDFA‑IIIase)做了鉴定，并以此酶作为亲本，利用基因突变技术，将其387位的半胱氨酸Cys替换成丙氨酸Ala，获得单点突变体酶C387A，在最适催化条件下(pH 6.5，55℃)催化底物双果糖酐合成菊二糖的比酶活提高了85.2％，催化效率提高了2倍。这一发现对于工业化制备菊二糖具有重要的研究价值，为进一步工业应用双果糖酐水解酶提供了有利保障。
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公开(公告)号：CN108034648A
公开(公告)日：2018-05-15
申请号：CN201810059404.6
申请日：2018-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物Dorea sp.的D‑阿洛酮糖3‑差向异构酶作为亲本，构建了突变体酶F154Y/E191D/I193F，该突变体的热稳定性和结构稳定性得到了提高：50℃和60℃的t1/2值分别达到20.47和3.09h；Tm值达到74.18℃。多点突变体的最适温度上升为75℃，与野生型酶相比提高了5℃。在最适催化条件下，酶催化底物D‑果糖生成D‑阿洛酮糖的相对酶活提高了3.8％，这一发现对于工业化制备D‑阿洛酮糖具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN108018269A
公开(公告)日：2018-05-11
申请号：CN201810060609.6
申请日：2018-01-22
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种热稳定性提高的果聚糖蔗糖酶突变体，属于酶工程技术领域。本发明将来源于微生物Brenneria sp.EniD312的果聚糖蔗糖酶作为亲本，利用基因突变技术，将其404位的谷氨酸Glu替换成色氨酸Trp，获得单突变体酶E404W；在最适催化条件下，酶催化底物蔗糖合成β‑(2,1)果聚糖levan的总酶活在35℃的半衰期由原来的4h提高到52h，45℃的半衰期由原来的2.1h提高到12.5h，55℃的半衰期由原来的42min提高到104min，这一发现对于工业化制备果聚糖levan具有重要的研究价值。
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公开(公告)号：CN107164434A
公开(公告)日：2017-09-15
申请号：CN201710505420.9
申请日：2017-06-28
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种生物合成菊二糖的方法，属于食品生物加工技术领域。本发明以菊糖为底物，采用菊糖果糖转移酶以及双果糖酐III水解酶两步法催化反应合成菊二糖。第一步是用菊糖果糖转移酶催化菊糖反应获得双果糖酐III，该步骤中所得合成的双果糖酐III可以用于下一步中菊二糖的生产，因此简化了双果糖酐III的纯化过程，节省能源消耗，降低生产成本。再向第一步反应所得的双果糖酐III溶液中加入双果糖酐III水解酶催化双果糖酐III合成菊二糖。本发明的工艺简单，效率高，菊糖合成菊二糖的转化率能够达到45%~50%。本发明提供了一种新型生产菊二糖的方法。
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公开(公告)号：CN106591271A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201710119423.9
申请日：2017-03-02
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/78 , A61K38/50 , A61P35/02 , C12N15/70 , C12P13/10 , C12Y305/03006 , C12N2800/101
Abstract: 一种酶活和温度稳定性提高的精氨酸脱亚胺酶突变体及其应用，属于基因工程和酶工程技术领域。该精氨酸脱亚胺酶突变体为酶活性中心附近的甘氨酸突变为脯氨酸，即Gly292 Pro。本发明利用定点突变技术对野生型精氨酸脱亚胺酶arcA编码基因进行分子改造，得到了一种突变体酶ADIG292P，相对于野生型精氨酸脱亚胺酶氨基酸序列的第292位甘氨酸突变为脯氨酸。本发明所述的定点突变改造的精氨酸脱亚胺酶与野生酶相比其酶活力提高了1.5倍，在40℃下的半衰期提高了5.43倍，解决了精氨酸脱亚胺酶催化瓜氨酸合成时，催化能力和温度稳定性低的问题，为高效合成瓜氨酸的工业化生产及医药应用奠定了基础。
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