一种β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的表达载体及表达工程菌和表达方法

    公开(公告)号:CN106282217A

    公开(公告)日:2017-01-04

    申请号:CN201610838951.5

    申请日:2016-09-21

    Applicant: 安徽大学

    Abstract: 本发明公开了一种β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的表达载体,按以下方法构建而成:(1)克隆β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的DNA序列;(2)克隆光敏调控单元的DNA序列;(3)将切割得到的β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的DNA酶切片段和光敏调控单元的DNA酶切片段连接至pET22b(+)载体上,即得所述β-葡萄糖苷酶突变体蛋白的表达载体。本发明通过插入光敏调控单元构建得到可光诱导的表达载体,该表达载体可通过光照手段对β-葡萄糖苷酶突变体蛋白进行诱导表达,与传统的诱导表达方法相比,光照诱导方法具有表达量高、无外源添加物的特点,此外光照诱导方法对蛋白的表达强度可通过光照强度进行控制,且不影响后续纯化步骤。

    一种β-葡萄糖苷酶突变体、其重组表达质粒及转化的工程菌株

    公开(公告)号:CN104726435A

    公开(公告)日:2015-06-24

    申请号:CN201510172770.9

    申请日:2015-04-13

    Applicant: 安徽大学

    CPC classification number: C12Y302/01021

    Abstract: 本发明通过基因定点突变的方法获乙醇耐受浓度提高的β-葡萄糖苷酶的基因、突变质粒、工程菌,并可在将工程菌诱导表达后,获得乙醇耐受浓度提高的β-葡萄糖苷酶。本发明以来自海洋未培养微生物来源的β-葡萄糖苷酶为基础,通过PCR定点突变,获得突变基因。在35℃条件下,相对野生型β-葡萄糖苷酶蛋白,获得的突变蛋白的乙醇耐受浓度IC50提高了1.8倍,且葡萄糖耐受浓度提高2倍,pH及温度稳定性提高,底物亲和力及催化效率得以提升。该突变体能够在较短时间内高效水解大豆异黄酮糖苷制备苷元,具有潜在应用价值。

    一种真菌漆酶诱导活性化合物及其发酵制备方法与应用

    公开(公告)号:CN102786411B

    公开(公告)日:2014-06-11

    申请号:CN201210138447.6

    申请日:2012-05-07

    Applicant: 安徽大学

    Abstract: 本发明属化合物分离纯化技术领域,涉及一种微生物来源的新型真菌漆酶高效诱导化合物的发酵制备、分离纯化工艺,及其在诱导真菌漆酶生产方面的应用。其特征在于包括下述步骤:通过真菌发酵制备含有活性化合物的发酵液,经过萃取获得的活性化合物粗提物依次经不同层析树脂吸附,以不同浓度甲醇-水作为洗脱剂纯化精制,最终获得纯化的活性化合物分子;获得的活性化合物在1~500?μM浓度下可以高效诱导漆酶生产真菌分泌胞外漆酶。本发明具有以下优点:诱导化合物来源于真菌次级代谢产物;诱导化合物工作浓度低,有效工作浓度为1~500μM;诱导化合物具有高的真菌漆酶诱导活性。

    一种真菌漆酶诱导活性化合物及其发酵制备方法与应用

    公开(公告)号:CN103834695A

    公开(公告)日:2014-06-04

    申请号:CN201410085685.4

    申请日:2012-05-07

    Applicant: 安徽大学

    Abstract: 本发明属化合物分离纯化技术领域,涉及一种微生物来源的新型真菌漆酶高效诱导化合物的发酵制备、分离纯化工艺,及其在诱导真菌漆酶生产方面的应用。其特征在于包括下述步骤:通过真菌发酵制备含有活性化合物的发酵液,经过萃取获得的活性化合物粗提物依次经不同层析树脂吸附,以不同浓度甲醇-水作为洗脱剂纯化精制,最终获得纯化的活性化合物分子;获得的活性化合物在1~500μM浓度下可以高效诱导漆酶生产真菌分泌胞外漆酶。本发明具有以下优点:诱导化合物来源于真菌次级代谢产物;诱导化合物工作浓度低,有效工作浓度为1~500μM;诱导化合物具有高的真菌漆酶诱导活性。

    一种灵芝漆酶的清洁高效生产方法

    公开(公告)号:CN100448989C

    公开(公告)日:2009-01-07

    申请号:CN200610096638.5

    申请日:2006-10-13

    Applicant: 安徽大学

    Abstract: 一种灵芝漆酶的清洁高效生产方法,以申请人自主选育的树舌灵芝ST为出发菌株,将其先接种在发酵培养基中制备种液,再将种液接种到同样的发酵培养基中于22~35℃培养3~8天,分离后得到漆酶制剂。发酵培养基由0.1~5%的玉米粉,1~7%的粮食麸皮、1~7%的花生饼粉和余量水组成。本方法生产的漆酶活力在9000U/L以上(愈创木酚法),该产量处于漆酶液态发酵生产法的国际领先水平。培养基为农副产品,无毒、廉价、无污染。本方法工艺简单、周期短、产率高,适于工业化生产。

    一种真菌共培养发酵生产漆酶的方法

    公开(公告)号:CN1958789A

    公开(公告)日:2007-05-09

    申请号:CN200610146143.9

    申请日:2006-11-11

    Applicant: 安徽大学

    Abstract: 一种真菌共培养发酵生产漆酶的方法,将栓菌AH28-2(Trametes sp.AH28-2)的菌悬液接种在发酵培养基中于22~37℃培养1~4天,然后加入木霉ZH1(Trichoderma sp.ZH1)的菌悬液继续培养5~10天,最后分离得到漆酶制剂,酶活达6,000U/L(愈创木酚法)。培养基为液体培养基,主要含一定量的碳源、氮源、钾与钠的磷酸盐、铜与铁的硫酸盐、腺嘌呤和维生素B等。本方法中不用芳香化合物和重金属离子诱导,安全、环保,酶活高且活力稳定。

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