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    一种猪伪狂犬病毒株
    32.
    发明公开
    一种猪伪狂犬病毒株 有权

    公开(公告)号：CN105200015A

    公开(公告)日：2015-12-30

    申请号：CN201510569963.8

    申请日：2015-09-09

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 陈红英 ,  杨明凡 ,  高晓云 ,  崔保安 ,  杨兴武 ,  张宇 ,  徐朋丽

    IPC: C12N7/00 ,  C12R1/93

    Abstract: 本发明公开了一种猪伪狂犬病毒株，其特征在于：猪伪狂犬病毒（Herpesviridae）毒株，CCTCC NO：V201314。本发明将PRV/HN2012株传至第7代，并对第7代病毒进行了病毒滴度TCID50的测定，结果TCID50为109.0。并将PRV/HN2012株接种小鼠，攻毒24h后，PRV/HN2012株感染组小鼠即出现神经症状，攻毒48h后，小鼠全部死亡，表明该毒株具有很强的毒性。基于此，通过对PRV/HN2012株理化特性研究，结果表明该毒株对分析纯氯仿敏感，属于有囊膜病毒；对酸、碱有较强的抵抗力，pH3.0的盐酸、pH11.0的NaOH处理1h使其失活；对热有较强抵抗力，56℃水浴处理1h才能失活；对胰蛋白酶敏感，紫外线处理30min，对其感染性影响不明显。

    猪圆环病毒2型高敏感性PK15细胞系L8的制备方法
    34.
    发明公开
    猪圆环病毒2型高敏感性PK15细胞系L8的制备方法 无效

    公开(公告)号：CN103898044A

    公开(公告)日：2014-07-02

    申请号：CN201410104575.8

    申请日：2014-03-20

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 侯贤敏 ,  郭敬 ,  崔保安 ,  郭官鹏 ,  陈红英

    IPC: C12N5/071 ,  C12R1/91

    Abstract: 本发明公开了一种猪圆环病毒2型高敏感性PK15细胞系L8的制备方法，它的步骤如下：（1）将PK15细胞复苏后培养于细胞瓶中长成细胞单层，用质量分数为0.25%的胰酶消化，然后加入DMEM生长液吹打，所述DMEM生长液含质量分数为10%的胎牛血清和质量分数为1%的双抗，分散细胞成单个，用系列稀释法进行细胞克隆；（2）通过间接免疫荧光筛选出对PCV2高敏感性的单细胞株。本发明采用更为方便高效的单细胞克隆技术获得一株对PCV2具有更高感染率的细胞系，命名为L8。通过对该细胞系的稳定性以及纯净性检测发现该细胞系能够稳定的提高PCV2在细胞内的增殖滴度。

    CSFV、PCV2与PRV多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR引物及其检测方法
    35.
    发明授权
    CSFV、PCV2与PRV多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR引物及其检测方法 失效

    公开(公告)号：CN102382902B

    公开(公告)日：2013-08-21

    申请号：CN201110221771.X

    申请日：2011-08-04

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 魏战勇 ,  胡慧 ,  刘芳 ,  崔保安 ,  宋亚鹏 ,  韩志涛

    IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

    Abstract: 本发明公开了一种CSFV、PCV2与PRV多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物及其检测方法，CSFV引物的序列如下：上游引物P1：5′-AAACGGAGGGACTAGCCGT-3′；下游引物P2：5′-TGCCATGTACAGCAGAGA-3′PRV引物的序列如下：上游引物P3：5′-CTCGCCATCGTCAGCAA-3′；下游引物P4：5′-GCTGCTCCTCCATGTCCTT-3′；PCV2引物的序列如下：上游引物P5：5′-GGGCCAGAATTCAACCTTACCC-3′；下游引物P6：5′-CGCACCTTCGGATATACTGTCA-3′。本发明通过猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、猪伪狂犬病毒三重SYBR Green Ⅰ定量PCR检测方法，能够同时检测CSFV、PRV和PCV2 3种DNA病毒，能最少检测183拷贝猪瘟病毒、231拷贝猪伪狂犬病毒和203拷贝猪圆环病毒2型；本发明的特异性试验结果良好，只出现三个特异性的峰值，重复性试验具有很好的稳定性，为有效检测和鉴别混合感染提供了一种成本低、快速、灵敏、特异、准确的新方法，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒的鉴别。

    PCV2、PRV与SIVH9亚型多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR引物及其检测方法
    36.
    发明公开
    PCV2、PRV与SIVH9亚型多重SYBRGreenⅠ实时荧光PCR引物及其检测方法 失效

    公开(公告)号：CN102373299A

    公开(公告)日：2012-03-14

    申请号：CN201110221752.7

    申请日：2011-08-04

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 魏战勇 ,  李明凤 ,  陈红英 ,  宋亚鹏 ,  韩志涛 ,  崔保安

    IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11 ,  G01N21/64

    Abstract: 本发明公开了一种PCV2、PRV与SIV H9亚型多重SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR引物及其检测方法，SIV H9亚型引物的序列如下：上游引物P1：5′-GGAACAACGCTTACCCTG-3′；下游引物P2：5′-GAGACCATTGACAAGAGGC-3′；PRV引物的序列如下：上游引物P3：5′-GGCATCGGCGACTACCT-3′；下游引物P4：5′-CGTCGTGCAGCGTGTAGAG-3′；PCV2引物的序列如下：上游引物P5：5′-GGGCCAGAATTCAACCTTACCC-3′；下游引物P6：5′-CGCACCTTCGGATATACTGTCA-3′。本发明分别设计扩增SIV H9亚型、PCV2和PRV的特异性引物，通过三重SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测方法能够同时检测SIV H9亚型、PCV2和PRV。SIV H9亚型、PCV2和PRV同时检出的极限拷贝数分别为184拷贝/μL，207拷贝/μL，193拷贝/μL。本发明的特异性试验结果良好，只出现三个特异性的峰值，重复性试验具有很好的稳定性并且本试验的最大优势在于能够同时检测SIV H9亚型、PCV2和PRV3种DNA病毒，有利于妊娠母猪繁殖障碍性病毒的鉴别。

    一种动物基因工程干扰素α和γ复合制剂及其生产方法
    37.
    发明授权
    一种动物基因工程干扰素α和γ复合制剂及其生产方法 失效

    公开(公告)号：CN101209345B

    公开(公告)日：2012-02-01

    申请号：CN200610128462.7

    申请日：2006-12-26

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 王彦彬 ,  崔保安 ,  夏平安 ,  王亚宾 ,  张红英

    IPC: A61K38/21 ,  C12N15/86 ,  C12N15/12 ,  A61P31/14 ,  A61P31/20 ,  C12Q1/68

    CPC classification number: Y02A50/473

    Abstract: 一种动物基因工程干扰素复合制剂及其生产方法和临床应用。该动物基因工程干扰素复合制剂通过提取动物外周血或脾淋巴细胞，经培养和体外诱导剂诱导，Trizol提取细胞总RNA，设计特异性引物，通过RT-PCR技术克隆干扰素基因，通过T-A策略将其连接到pGEM-T载体；重新设计引物，两端加入不同的酶切序列和起始密码子ATG、终止密码子TAA，并去除前导肽序列，以重组T载体为模板进行PCR扩增，获取动物干扰素基因表达片段；将表达片段进行稀有密码子突变，经双酶切后，胶回收目的片段，连接到经同样双酶切的载体pFastBacTM Dual上；将动物interferon-α克隆到Polyhedrin promoter控制下的多克隆位点，将同一种属动物interferon-γ克隆到p10 promoter控制下的多克隆位点；将构建好的载体pFastBacTM Dual+interferonα+interferonγ转染到DH10BacTM E.coli进行重组；经蓝白斑筛选，PCR鉴定后，将构建好的recombinant bacmid提取纯化，通过脂质体法转染SF9昆虫细胞；表达产物鉴定、纯化；动物基因工程干扰素复合制剂抗病毒活性检测和临床应用效果评价。该动物基因工程干扰素在昆虫细胞共表达的生产方法和临床应用。

    一种禽流感H9N2亚型病毒毒株及其应用
    38.
    发明公开
    一种禽流感H9N2亚型病毒毒株及其应用 失效

    公开(公告)号：CN102093982A

    公开(公告)日：2011-06-15

    申请号：CN201010123682.7

    申请日：2010-02-10

    Applicant: 河南农业大学

    Inventor： 李新生 ,  崔保安 ,  崔沛 ,  高文明 ,  李双亮 ,  陈红英 ,  黄宗梅

    IPC: C12N7/00 ,  C07K14/11 ,  C07K16/10 ,  C07K16/06 ,  C12R1/93

    Abstract: 本发明公开了一种禽流感H9N2亚型病毒毒株，禽流感H9N2亚型病毒毒株(Orthomyxoviridae)，CGMCC NO：3526。本发明的禽流感H9N2亚型病毒毒株具有良好的特异性和免疫原性，鸡胚尿囊液凝集红细胞的作用不能被抗NDV阳性血清、抗EDS76阳性血清、抗M41阳性血清、抗H5亚型禽流感病毒单因子阳性血清以及抗H7亚型禽流感病毒单因子阳性血清所抑制，而能被H9亚型禽流感病毒单因子阳性血清抑制。免疫雏鸡能产生对H9特异的HI抗体。本发明作为制造效果良好的疫苗毒株，预防禽类的H9亚型禽流感，用于病毒的鉴定和流行病学的调查。

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