基于3T-seq全基因组范围分析APA的方法

    公开(公告)号:CN103911449A

    公开(公告)日:2014-07-09

    申请号:CN201410138517.7

    申请日:2014-04-08

    CPC classification number: C12Q1/6869 C12Q2563/143 C12Q2525/173 C12Q2525/131

    Abstract: 本发明涉及一种检测RNA?PAS(Poly?A?Site)的方法,提供了一种基于3T-seq全基因组范围分析APA的方法,包括含有oligo?dT的磁珠制备,即将5'端生物素修饰的oligo?dT引物与带链霉亲和素的磁珠混合结合;用所述磁珠与总RNA混合,筛选含有Poly?A的RNA;逆转录,双链cDNA第二链合成,双链cDNA断裂;移除Poly?A结构;末端修饰后连接测序接头;文库回收。该方法减少了RNA水平操作,在DNA水平移除Poly?A序列,消除Poly结构对测序的影响;选择双链DNA断裂酶处理,在不影响文库质量的基础上在DNA水平断裂;简化实验流程,降低实验难度和造价,使其应用范围更广。

    四色荧光标记可逆终端及其在DNA测序中的用途

    公开(公告)号:CN103484106A

    公开(公告)日:2014-01-01

    申请号:CN201310401580.0

    申请日:2013-09-05

    Abstract: 本发明公开了一种四色荧光标记可逆终端及其在DNA测序中的用途;所述可逆终端的结构式如式(I)所示:(I);其中,R1为三磷酸盐;R2为H或者OH;碱基为U,C,A,G或其衍生物;连接单元为在温和条件下可以断裂的双官能团化合物;荧光基团选自BODIPY、荧光素、罗丹明、香豆素、呫吨、花青、芘、酞菁、alexa、squarene染料、产生能量转移染料的组合以及其衍生物中的一种。本发明的可逆终端可用于DNA单分子测序;同时,本发明的可逆终端的合成所需原料简单易得,合成过程均为常规化学反应,可用于大规模推广使用,并且生物学评价结果表明该类可逆终端能完全满足高通量测序的生化反应要求,具备很好的实用前景。

    一种单细胞ChIP-seq文库的制备方法

    公开(公告)号:CN113718017A

    公开(公告)日:2021-11-30

    申请号:CN202111061395.2

    申请日:2021-09-10

    Inventor: 赵小东 胡丛霞

    Abstract: 本发明公开了一种单细胞ChIP‑seq文库的制备方法,涉及表观遗传学领域,添加物包括辅助DNA添加物或者抗原类似物;单细胞ChIP‑seq文库制备方法为将单细胞分选到96孔板中,经过染色质开放处理之后,每个样品孔中加入带有特异序列标签的Tn5转座酶,在转座酶的作用下,实现对单个细胞核的标记。经过特异性抗体捕获之后,对所得样品进行扩增和纯化。文库由Illumina Nextseq 500测序平台进行测序。本发明添加辅助DNA,降低样品损失;添加抗原类似物,降低抗体的非特异性吸附,增加免疫沉淀反应效率;还提供一种Tn5转座酶介导的染色质打断技术,避免了低效率的传统TruSeq建库法。

    一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术

    公开(公告)号:CN109023537B

    公开(公告)日:2021-10-08

    申请号:CN201811025369.2

    申请日:2018-09-04

    Abstract: 本发明提供了一种微量DNA样品高通量测序文库的构建技术。具体地,本发明方法包括步骤:(a)提供DNA片段和辅助核酸片段;(b)向DNA片段和辅助核酸片段两端添加接头;(c)用特异性抗体捕获、富集末端带有接头的DNA片段和辅助核酸片段;(d)用特异性酶去除所述辅助核酸片段;(e)用特异性引物对所述步骤(c)中捕获、富集的DNA片段和辅助核酸片段进行扩增,从而获得扩增产物。本发明方法更适用于少量来源的微量样品的文库构建;文库质量好,无污染;成本较低,具有较高的普遍适用性。

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