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公开(公告)号：CN102559718B
公开(公告)日：2013-09-11
申请号：CN201110406844.2
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种嗜热羧酸酯酶基因工程菌的构建及其酶的应用。嗜热羧酸酯酶(DtEstA)基因来源于嗜热圆锥网团菌DSM6724(Dictyoglomus turgidumDSM6724)；本发明采用生物工程技术，通过细菌的培养、目的基因钓取、构建表达载体、及将载体转化到宿主细胞中等步骤构建成嗜热羧酸酯酶基因工程菌，再经细胞培养、收集沉淀、超声破碎、热处理、亲和层析等步骤纯化获得嗜热羧酸酯酶DtEstA。本发明的嗜热羧酸酯酶DtEstA具有很好的热稳定性，及对金属离子、有机溶剂及表面活性剂的抗性，可用作化学合成和食品加工过程中很好的生物催化剂。
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公开(公告)号：CN102660517B
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201110406922.9
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂肪酶突变体具有SEQ ID No：2、SEQ ID No：3或SEQ ID No：4所示的氨基酸残基序列，SEQ ID No：2、SEQ ID No：3和SEQ ID No：4均由317个氨基酸组成。本发明运用半理性设计的方法，对南极假丝酵母脂肪酶B基因进行多轮定点饱和突变，获取脂肪酶突变体，这些突变体包含氨基酸突变D223G、L278M及它们的组合。以各自的T5015及48℃的半衰期t1/2来表示，脂肪酶突变体的热稳定性得到了提高。具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN109706133B
公开(公告)日：2022-12-27
申请号：CN201711009481.2
申请日：2017-10-25
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及一组新型酯酶及其应用，具体地，涉及一组对布洛芬类药物具有立体选择性嗜热酯酶及其应用。本发明利用布洛芬的酯化衍生物作为筛选底物，利用微流控双色荧光筛选体系对嗜热酯酶进行多轮定向进化改造，获得了一组立体选择性显著提升的酯酶。本发明还涉及了所述酯酶在制备以布洛芬为代表的芳基丙酸类分子衍生物中的应用。
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公开(公告)号：CN112457358A
公开(公告)日：2021-03-09
申请号：CN202011459460.2
申请日：2020-12-11
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明涉及生物药物技术领域，特别是涉及一种化合物、一氧化氮供体前药化合物及其制备方法和应用。该化合物具有如式I‑1所示的结构，用于制备一氧化氮供体前药化合物，具有如式I所示的结构。该化合物的制备方法包括如下步骤：步骤c)：由式I‑2化合物与吡咯烷基重氮二醇钠盐缩合制备获得式I‑1化合物。该一氧化氮供体前药化合物的制备方法包括如下步骤：步骤d)：由式I‑1化合物脱乙酰基制备获得式I化合物。该一氧化氮供体前药化合物在内切纤维素酶催化下可控释放一氧化氮的应用，在内切纤维素酶Cel5A‑h38天然生物正交催化下可控释放一氧化氮的应用。由此利用其可控按需释放一氧化氮的特性，用于制备可控释放一氧化氮药物。
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公开(公告)号：CN108342370A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201710046116.2
申请日：2017-01-22
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N9/06 , C12N15/53 , C12P21/00 , G01N33/72 , G01N33/573
CPC classification number: C12N9/0022 , C07K14/805 , G01N33/573 , G01N33/723 , G01N2333/805 , G01N2333/902
Abstract: 本发明涉及一组果糖基肽氧化酶突变体及其应用。本发明通过对果糖基肽氧化酶的突变体筛选，获得了稳定性明显提高的果糖基肽氧化酶突变体。本发明还涉及了果糖基肽氧化酶在催化果糖基肽化合物氧化脱糖基中的应用，可进一步用于检测糖化血红蛋白的试剂盒或传感器中。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108251394A
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201611240470.0
申请日：2016-12-29
Applicant: 上海交通大学 , 开平牵牛生化制药有限公司
CPC classification number: C12N9/1051 , C12P19/00 , C12P19/26
Abstract: 本发明涉及一种鞘糖脂内切糖苷酶，所述糖苷酶不仅显著提高了水解活性，还进一步拓宽了底物范围；在相应被改造的糖苷合成酶的基础上，也显著提高了合成酶的活性。本发明还涉及到一种鞘糖脂内切糖苷酶在鞘糖脂或寡糖制备、分析以及生产中的应用。
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公开(公告)号：CN104498450B
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201410804515.7
申请日：2014-12-18
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体涉及从褶皱徦丝酵母脂肪酶1(Candida rugosa lipase1：LIP1)基因出发，选择活性中心414位点进行定点饱和突变，获得一系列突变体。本发明所述提高热稳定性的LIP1突变体能够在高温下发挥有效的催化活力，提高了在工业中的应用潜力；并且突变体在底物选择性偏向短链酰基酯，这样的LIP1突变体，结构上揭示了变化机制。
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公开(公告)号：CN106085975A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610428122.X
申请日：2016-06-16
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围以内的高柔性残基为靶标位点，通过突变筛选，获得酶热动力学稳定性提高的突变体。在该策略的指导下，显著提高了结构高度复杂的褶皱假丝酵母脂肪酶1的热稳定性。结合结构上最小蛋白(LipA)和中度复杂的蛋白(CalB)的稳定性变化结果，发现距离催化残基附近的高B‑factor残基的突可以显著提高酶突变的成功率。同时，借助突变体结构‑功能关系的系统分析将为深入研究酶区域稳定化规律、发展酶稳定化技术奠定了基础。
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公开(公告)号：CN105218583A
公开(公告)日：2016-01-06
申请号：CN201510573534.8
申请日：2015-09-10
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明属于酶工程领域，公开了一种基于羧基香豆素的磷酸三酯酶荧光底物，以及基于该底物的磷酸三酯酶的高通量筛选方法。该方法为磷酸三酯酶的体外区室化-荧光激活细胞分选超高通量筛选技术。本发明基于羧基香豆素的磷酸三酯酶底物，反应后的荧光产物具有非常好的液滴保留性，在进行酶活性定量与筛选中具有灵敏度高、定量准确的优点。底物和反应产物之间亲水性的差异，使底物可以加入外水相中并通透油相进行酶反应；生成的产物由于亲水性提高而保留在液滴中，从而实现“液滴荧光捕获”的效应，准确地控制反应时间、降低荧光背景干扰、提高筛选准确性。
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公开(公告)号：CN104357418A
公开(公告)日：2015-02-18
申请号：CN201410534597.8
申请日：2014-10-11
Applicant: 上海交通大学
CPC classification number: C12N9/1048 , C12P33/02 , C12P33/20
Abstract: 本发明公开了一种糖基转移酶，可以催化原人参二醇糖基化合成稀有人参皂苷Rh2。对于该糖基转移酶进行了改造，得到了其催化效率优化的多个突变体。这些突变体用于体外酶法合成稀有人参皂苷Rh2的产率比野生型有明显提高。并且该糖基转移酶及其突变体可以用于微生物体内全合成稀有人参皂苷Rh2。
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