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公开(公告)号：CN106085975B
公开(公告)日：2019-11-12
申请号：CN201610428122.X
申请日：2016-06-16
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围以内的高柔性残基为靶标位点，通过突变筛选，获得酶热动力学稳定性提高的突变体。在该策略的指导下，显著提高了结构高度复杂的褶皱假丝酵母脂肪酶1的热稳定性。结合结构上最小蛋白(LipA)和中度复杂的蛋白(CalB)的稳定性变化结果，发现距离催化残基附近的高B‑factor残基的突可以显著提高酶突变的成功率。同时，借助突变体结构‑功能关系的系统分析将为深入研究酶区域稳定化规律、发展酶稳定化技术奠定了基础。
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公开(公告)号：CN104498450A
公开(公告)日：2015-04-08
申请号：CN201410804515.7
申请日：2014-12-18
Applicant: 上海交通大学
CPC classification number: C12N9/18 , C12Y301/01003
Abstract: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体涉及从褶皱徦丝酵母脂肪酶1(Candida rugosa lipase1：LIP1)基因出发，选择活性中心414位点进行定点饱和突变，获得一系列突变体。本发明所述提高热稳定性的LIP1突变体能够在高温下发挥有效的催化活力，提高了在工业中的应用潜力；并且突变体在底物选择性偏向短链酰基酯，这样的LIP1突变体，结构上揭示了变化机制。
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公开(公告)号：CN102660517A
公开(公告)日：2012-09-12
申请号：CN201110406922.9
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂肪酶突变体具有SEQ ID No：2、SEQ ID No：3或SEQ ID No：4所示的氨基酸残基序列，SEQ ID No：2、SEQ ID No：3和SEQ ID No：4均由317个氨基酸组成。本发明运用半理性设计的方法，对南极假丝酵母脂肪酶B基因进行多轮定点饱和突变，获取脂肪酶突变体，这些突变体包含氨基酸突变D223G、L278M及它们的组合。以各自的T5015及48℃的半衰期t1/2来表示，脂肪酶突变体的热稳定性得到了提高。具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102660517B
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201110406922.9
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明提供了一种热稳定性提高的脂肪酶突变体及其构建方法。热稳定性提高的脂肪酶突变体由南极假丝酵母脂肪酶B基因出发，运用多轮定点饱和突变而获得；所述南极假丝酵母脂肪酶B具有SEQ ID No：1所示的氨基酸残基序列；所述脂肪酶突变体具有SEQ ID No：2、SEQ ID No：3或SEQ ID No：4所示的氨基酸残基序列，SEQ ID No：2、SEQ ID No：3和SEQ ID No：4均由317个氨基酸组成。本发明运用半理性设计的方法，对南极假丝酵母脂肪酶B基因进行多轮定点饱和突变，获取脂肪酶突变体，这些突变体包含氨基酸突变D223G、L278M及它们的组合。以各自的T5015及48℃的半衰期t1/2来表示，脂肪酶突变体的热稳定性得到了提高。具有较高的实际应用价值和广阔的市场前景。
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公开(公告)号：CN108342370A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201710046116.2
申请日：2017-01-22
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N9/06 , C12N15/53 , C12P21/00 , G01N33/72 , G01N33/573
CPC classification number: C12N9/0022 , C07K14/805 , G01N33/573 , G01N33/723 , G01N2333/805 , G01N2333/902
Abstract: 本发明涉及一组果糖基肽氧化酶突变体及其应用。本发明通过对果糖基肽氧化酶的突变体筛选，获得了稳定性明显提高的果糖基肽氧化酶突变体。本发明还涉及了果糖基肽氧化酶在催化果糖基肽化合物氧化脱糖基中的应用，可进一步用于检测糖化血红蛋白的试剂盒或传感器中。
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公开(公告)号：CN104498450B
公开(公告)日：2017-02-22
申请号：CN201410804515.7
申请日：2014-12-18
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明属于蛋白质工程技术领域，具体涉及从褶皱徦丝酵母脂肪酶1(Candida rugosa lipase1：LIP1)基因出发，选择活性中心414位点进行定点饱和突变，获得一系列突变体。本发明所述提高热稳定性的LIP1突变体能够在高温下发挥有效的催化活力，提高了在工业中的应用潜力；并且突变体在底物选择性偏向短链酰基酯，这样的LIP1突变体，结构上揭示了变化机制。
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公开(公告)号：CN106085975A
公开(公告)日：2016-11-09
申请号：CN201610428122.X
申请日：2016-06-16
Applicant: 上海交通大学
Abstract: 本发明公开了一种高效提高酶热动力学稳定性的通用策略；该策略的具体实施路线为：以酶活性部位的催化残基为中心，根据该酶晶体结构中的B‑factor值来选择周围以内的高柔性残基为靶标位点，通过突变筛选，获得酶热动力学稳定性提高的突变体。在该策略的指导下，显著提高了结构高度复杂的褶皱假丝酵母脂肪酶1的热稳定性。结合结构上最小蛋白(LipA)和中度复杂的蛋白(CalB)的稳定性变化结果，发现距离催化残基附近的高B‑factor残基的突可以显著提高酶突变的成功率。同时，借助突变体结构‑功能关系的系统分析将为深入研究酶区域稳定化规律、发展酶稳定化技术奠定了基础。
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公开(公告)号：CN102559567A
公开(公告)日：2012-07-11
申请号：CN201110406838.7
申请日：2011-12-08
Applicant: 上海交通大学
IPC: C12N1/21 , C12N15/70 , C12N9/42 , D21C9/00 , C12P19/14 , A23K1/165 , D01C1/00 , C12G3/02 , C12R1/01 , C12R1/19
Abstract: 本发明提供了一种嗜热内切木聚糖酶基因工程菌的构建及其酶的应用。嗜热内切木聚糖酶基因来源于热解纤维素菌(Caldicellulosiruptor bescii DSM 6725)；本发明采用生物工程技术，通过细菌的培养、目的基因钓取、构建表达载体、及将载体转化到宿主细胞中等步骤构建成嗜热内切木聚糖酶基因工程菌，再经细胞培养、收集沉淀、超声破碎、热处理、亲和层析等步骤纯化获得嗜热内切木聚糖酶。本发明的嗜热内切木聚糖酶具有很好的热稳定性，及对金属离子、有机溶剂及表面活性剂的抗性，可用于造纸、食品、饲料、纺织、酿酒和医药的生产中。
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