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公开(公告)号：CN110184233B
公开(公告)日：2023-07-25
申请号：CN201910406941.8
申请日：2019-05-15
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明提供一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及其应用，所述添加剂为亚甲基蓝，且所述亚甲基蓝的添加浓度为10～200nmol/L。本发明还提供了所述卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高体外卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育中的应用；在提高卵母细胞成熟质量中的应用，以及在提高卵母细胞的抗氧化能力中的应用。本发明提供的添加剂添加到卵母细胞体外成熟培养液中，用于体外培养卵母细胞和早期胚胎，可提高动物卵母细胞体外成熟率，早期胚胎卵裂率、囊胚率。提高体外卵母细胞的成熟质量，提高卵母细胞的抗氧化能力。
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公开(公告)号：CN116162653A
公开(公告)日：2023-05-26
申请号：CN202310331335.0
申请日：2023-03-30
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N5/071
Abstract: 本发明涉及生物技术和基因工程的技术领域，具体涉及一种靶向切除猪SlamF1基因编码区DNA的成对编辑位点、使用方法及其应用，所述猪SlamF1基因编辑位点包括T1和T2两个编辑位点，该两个编辑位点位于猪4号染色体SlamF1基因编码区的第1外显子区域。本发明提供的两个能基于CRISPR技术有效编辑猪SlamF1基因的靶位点，该靶位点可用于Cas9介导的猪SlamF1基因打靶，并能够将SlamF1基因功能失活，为研究SlamF1基因在猪抗病育种中的功能验证、在猪疾病抗性中的作用机制提供实验材料。
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公开(公告)号：CN113234758B
公开(公告)日：2022-11-15
申请号：CN202110517953.5
申请日：2021-05-12
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85 , C12N15/877 , C12N15/12 , C12N5/10 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及生物工程领域，特别是涉及利用PiggyBac转座酶系统构建无痕工程动物的方法。本发明利用受体基因组天然的“TTAA”四联体序列，以及修复模板上携带的PiggyBac转座酶的识别序列，将基因打靶过程中引入的选择标记基因删除，实现无残留的基因编辑，从而彻底消除生物安全隐患。由此可见，采用本发明所述PiggyBac转座酶系统能实现“无痕”打靶，解决了现有技术无法克服的瓶颈。而且本发明将CRISPR/Cas9和PiggyBac两个技术联合使用能够实现保真度100％的基因突变和无残留基因编辑，是目前生物安全技术水平最高的方法。
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公开(公告)号：CN104651402B
公开(公告)日：2021-05-14
申请号：CN201510118781.9
申请日：2015-03-18
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/85
Abstract: 本发明公开了一种通用型基因打靶载体，属于生物工程领域。该通用型基因打靶载体使用新霉素磷酸转移酶和EGFP为正选择标记，DsRed为负选择标记；正选择标记基因表达框的两侧各含有1个同向排列的LoxP位点；在LoxP位点附近各含有一段由稀有限制性内切酶位点组成的多克隆位点，便于基因打靶臂的克隆。该载体含有2个归巢限制性内切酶位点，分别为I‑CeuI和I‑SceI，可作为通用酶切位点将该载体线性化。本发明提供的通用型基因打靶载体，不仅具备单药物和双荧光筛选功能，而且其含有的LoxP位点可介导选择标记的高效删除反应，这为动物安全转基因技术提供了新材料，具有重要的应用前景。
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公开(公告)号：CN111778252A
公开(公告)日：2020-10-16
申请号：CN202010690620.8
申请日：2020-07-17
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/12 , C12N5/10 , C12Q1/6858
Abstract: 本发明提供了一种靶向敲除SST基因的sgRNA及其CRISPR/Cas9系统和应用，属于基因敲除技术领域。本发明提供了一种靶向敲除SST基因的sgRNA，包括SST sgRNA1和SST sgRNA2，还提供了包含所述sgRNA的CRISPR/Cas9系统。将所述CRISPR/Cas9系统转染至猪肾成纤维细胞中，筛选得到的阳性细胞，取得较高的基因删除效率，同时CRISPR/Cas9系统通过对猪SST基因进行完全性基因敲除，可以提高猪的生长速度，从而提高养猪业的经济效益，同时所述CRISPR/Cas9系统对进一步研究SST基因的功能及其与某些疾病的相互关联具有十分重要的意义。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110684720A
公开(公告)日：2020-01-14
申请号：CN201910973104.3
申请日：2019-10-14
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/073
Abstract: 本发明涉及胚胎工程的技术领域，具体涉及一种以异种动物间的卵母细胞为介质获得雄原核的方法，包括以下步骤：步骤1、获取带有第一极体的动物A的成熟卵母细胞并置于动物B的体外受精液微滴中；步骤2、将所述动物B的精子注入步骤1中的含有所述卵母细胞的体外受精液微滴中，获得精卵混合微滴；步骤3、将步骤2得到的精卵混合微滴置于CO2培养箱中孵育，至所述动物B的精子进入所述卵母细胞的细胞质形成雄原核；其中，所述动物A和动物B为异种动物。本发明的方法中，利用异种动物不交叉受精的生殖隔离的受精生物学原理，运用体外受精的方法以异种动物的卵母细胞作为介质来获得另一动物的雄原核，雄原核的形成率高达17.8％以上。
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公开(公告)号：CN110184233A
公开(公告)日：2019-08-30
申请号：CN201910406941.8
申请日：2019-05-15
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N5/075
Abstract: 本发明提供一种卵母细胞体外成熟培养液添加剂及其应用，所述添加剂为亚甲基蓝，且所述亚甲基蓝的添加浓度为10～200nmol/L。本发明还提供了所述卵母细胞体外成熟培养液添加剂在提高体外卵母细胞体外成熟及早期胚胎发育中的应用；在提高卵母细胞成熟质量中的应用，以及在提高卵母细胞的抗氧化能力中的应用。本发明提供的添加剂添加到卵母细胞体外成熟培养液中，用于体外培养卵母细胞和早期胚胎，可提高动物卵母细胞体外成熟率，早期胚胎卵裂率、囊胚率。提高体外卵母细胞的成熟质量，提高卵母细胞的抗氧化能力。
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公开(公告)号：CN108342452A
公开(公告)日：2018-07-31
申请号：CN201810106706.4
申请日：2018-02-02
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12Q1/6806
Abstract: 本发明公开了一种用于微量细胞中基因快速检测的方法及应用，该方法包括以下步骤：包括微量细胞收集、细胞裂解、PCR扩增和检测。本发明解决了细胞裂解过程中存在的裂解不彻底、细胞碎片和残留蛋白酶K影响PCR反应效率等问题，将细胞裂解产物直接用于PCR反应，简化了实验步骤，提高了检测效率。
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公开(公告)号：CN107699571A
公开(公告)日：2018-02-16
申请号：CN201710796136.1
申请日：2017-09-06
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/16 , C12N15/113 , C12N15/90
CPC classification number: C07K14/655 , C12N15/113 , C12N15/907
Abstract: 本发明公开了一种猪生长抑素基因编辑位点及其应用，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，本发明将含有该编码序列的sgRNA和Cas9mRNA通过胞质显微注射法注入猪胚胎中，实现对猪SST基因的定点突变。本发明通过CRISPR-Cas9技术在胚胎水平上对猪内源基因SST进行编辑。统计结果表明，该位点经过SSA luciferase检测体外酶切活性为65％，并能够在胚胎水平上面敲除猪SST基因，在细胞内形成SST的点突变。本发明对促进内源基因敲除或外源基因定点整合技术在转基因猪研究和生产中的应用具有十分重要的作用。
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公开(公告)号：CN106520838A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201610945400.9
申请日：2016-10-24
Applicant: 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
IPC: C12N15/877 , C12N15/89 , A01K67/027
CPC classification number: C12N15/8778 , A01K67/0278 , A01K2227/108 , C12N15/89
Abstract: 本发明公开了一种体细胞核移植重组胚注射基因新方法，该方法包括以下步骤：目的基因的制备、体细胞核移植以及显微注射技术。在获取目的基因之后，构建表达载体，利用显微操作去除卵母细胞的细胞核，然后将体细胞注入去核的卵母细胞间隙，再将外源基因直接注入体细胞，通过一步电融合、激活，构建重组胚胎，胚胎移植获取转基因后代。本发明避免大片段的基因转染细胞、筛选，提高了转基因效率，节约时间，扩大了转基因应用范围。需要特别注意的是，在核移植操作过程中，采用透明带下注射体细胞，易于显微注射外源目的基因。
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