公开(公告)号：CN102154513B

公开(公告)日：2013-01-30

申请号：CN201110063355.1

申请日：2011-03-16

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  何孔旺 ,  毛立 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  王小敏

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种检测猪Hokovirus的PCR检测方法，属于生物技术领域。具体采用25μl的PCR反应体系，在0.2mlPCR反应管内分别加入缓冲液，上、下游引物，DNA聚合酶以及提取的DNA模板，用灭菌超纯水加至总体积，将试剂混合均匀后，至于PCR扩增仪中，进行变性、退火、延伸，共循环35次；PCR反应结束后，取10μl产物在琼脂糖凝胶上，使用TAE缓冲液进行电泳，在紫外投射仪下观察PCR产物，并与标准分子量相对照，阳性样品可出现540bp片段。本发明所提供的检测方法敏感性高、特异性好、操作简便、迅速，并且对检测材料质量要求低，便于临床上的应用。

公开(公告)号：CN102206607A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110087699.6

申请日：2011-04-08

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 何孔旺 ,  张雪寒 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  叶青 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/70 ,  A61K39/108 ,  A61P31/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7三基因缺失菌株，属于生物技术领域。①抗性诱导，获得具有链霉素抗性的EHECO157:H7菌株。②缺失株构建，首先EHECO157:H7（△hly），而后依次构建EHECO157:H7（△hly△stx）和EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）。EHECO157:H7（△hly△stx△toxB）致病性和小鼠体内定植能力较亲本菌株有明显降低而免疫原性良好。本发明构建了EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），并明确了致病性和定植特性。本发明构建的缺失菌株EHECO157:H7（△hly△stx△toxB），可用于研制EHEC基因缺失活疫苗，免疫接种动物以减少EHECO157:H7在肠道内的定植，进而降低人类感染EHECO157:H7的机会，保障人类身心健康。

公开(公告)号：CN102154513A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：CN201110063355.1

申请日：2011-03-16

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  何孔旺 ,  毛立 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  倪艳秀 ,  郭容利 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  王小敏

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种检测猪Hokovirus的PCR检测方法，属于生物技术领域。具体采用25μl的PCR反应体系，在0.2mlPCR反应管内分别加入缓冲液，上、下游引物，DNA聚合酶以及提取的DNA模板，用灭菌超纯水加至总体积，将试剂混合均匀后，至于PCR扩增仪中，进行变性、退火、延伸，共循环35次；PCR反应结束后，取10μl产物在琼脂糖凝胶上，使用TAE缓冲液进行电泳，在紫外投射仪下观察PCR产物，并与标准分子量相对照，阳性样品可出现540bp片段。本发明所提供的检测方法敏感性高、特异性好、操作简便、迅速，并且对检测材料质量要求低，便于临床上的应用。

公开(公告)号：CN103865859B

公开(公告)日：2015-10-21

申请号：CN201410130127.5

申请日：2014-04-02

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 吕立新 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周俊明 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  李彬 ,  温立斌 ,  王小敏 ,  汪伟

IPC: C12N1/20 ,  A61K39/085 ,  A61P31/04 ,  C12R1/44

Abstract: 本发明提供一株松鼠葡萄球菌、疫苗及其制备方法，属生物技术领域。本发明提供松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）NJ1306，保藏号为CCTCC NO: M 2013702。试验证明松鼠葡萄球菌（Staphylococcus sciuri）NJ1306对BALB/c小鼠和仔猪都有致病性。本发明还提供松鼠葡萄球菌灭活疫苗，含有灭活的NJ1306株。将灭活的松鼠葡萄球菌培养液和佐剂混合均匀，得到松鼠葡萄球菌灭活油乳剂疫苗。采用本发明松鼠葡萄球菌NJ1306制成的灭活油乳剂疫苗，可以对BALB/c小鼠提供很好的保护力，说明该菌株具有良好的免疫原性。

公开(公告)号：CN104777312A

公开(公告)日：2015-07-15

申请号：CN201510098638.8

申请日：2015-03-05

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 李彬 ,  孙冰 ,  何孔旺 ,  杜露平 ,  郭容利 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  俞正玉 ,  张雪寒 ,  茅爱华 ,  吕立新 ,  胡屹屹 ,  周俊明 ,  王小敏 ,  祝昊丹 ,  于洋

IPC: G01N33/68

CPC classification number: G01N33/56983 ,  G01N2333/17

Abstract: 本发明提供了一种检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的ELISA试剂盒，该试剂盒是以纯化的重组猪传染性胃肠炎病毒N蛋白作为包被抗原的ELISA板条，还包括洗涤液、血清稀释液、底物显色液、羊抗猪酶标二抗、终止液、TGEV阳性血清和TGEV阴性血清。本发明试剂盒用于检测猪传染性胃肠炎病毒的抗体，经检验，该试剂盒特异性、敏感性、重复性均良好，检测准确、操作简便，适合于在临床应用中进行推广，为猪传染性胃肠炎病的快速检测提供了可靠手段。

公开(公告)号：CN104730246A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510048127.5

申请日：2015-01-29

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  李盟 ,  汪伟 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  周俊明 ,  王小敏 ,  周萍

IPC: G01N33/577

CPC classification number: G01N33/56916

Abstract: 本发明公开了检测大肠杆菌O157:H7的双抗ELISA试剂盒，包括酶标板、单抗、酶标试剂、底物显色液、终止液、阳性标准抗原、阴性标准品、10×洗涤液，酶标板为包被有大肠杆菌O157:H7全菌抗原的兔抗血清的96孔板，单抗为EO06。本发明试剂盒通过制备紧密素多肽抗原，免疫获得高滴度和高亲和力的单克隆抗体，用于研制夹心ELISA方法，提高检测敏感性和特异性。

公开(公告)号：CN104498623A

公开(公告)日：2015-04-08

申请号：CN201410696032.X

申请日：2014-11-26

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 倪艳秀 ,  何孔旺 ,  郭容利 ,  李彬 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  吕立新 ,  祝昊丹 ,  周俊明 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  王小敏 ,  汪伟 ,  胡屹屹

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: C12Q1/701 ,  C12Q1/686 ,  C12Q2600/16 ,  C12Q2537/143

Abstract: 本发明涉及猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株鉴别诊断用引物及其检测试剂盒，属于生物技术领域。以总RNA为模板，利用鉴别诊断猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的检测引物进行RT-PCR扩增，反应结束后根据扩增片段的数量和分子量大小判定结果。本发明的引物特异性好，检测方法快速简单，准确性高，为猪流行性腹泻病毒强毒株和弱毒株的鉴别诊断提供了保证。

公开(公告)号：CN103866030A

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201410130191.3

申请日：2014-04-02

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  汪伟 ,  何孔旺 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  李彬 ,  周俊明 ,  王小敏

IPC: C12Q1/68 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/19

CPC classification number: C12Q1/6844 ,  C12Q1/10 ,  C12Q2531/119

Abstract: 本发明涉及食品和生物领域检测，特别是涉及大肠杆菌O157:H7的LAMP检测引物及检测试剂盒。是一种运用4条特异性引物检测样品中大肠杆菌O157:H7的方法及试剂盒。其步骤为：步骤一，提取待检样品中的核苷酸；步骤二，利用所述LAMP检测试剂盒检测样品中核苷酸，判断样品中是否含有大肠杆菌O157:H7。本发明的试剂盒操作简便、结果直观，敏感性和特异性良好。

公开(公告)号：CN103255171A

公开(公告)日：2013-08-21

申请号：CN201310072085.X

申请日：2013-03-07

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 王小敏 ,  何孔旺 ,  汪伟 ,  周忠涛 ,  俞正玉 ,  倪艳秀 ,  温立斌 ,  张雪寒 ,  郭容利 ,  吕立新 ,  李彬 ,  周俊明 ,  茅爱华 ,  叶青 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N15/866 ,  A61K48/00 ,  A61K39/12 ,  A61P31/20 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及猪圆环病毒（PCV）2型密码子优化的ORF2基因重组杆状病毒病毒样粒子，属于生物制药领域。将所有PCV2ORF2序列进行比对分析，得到人工合成的密码子优化的PCV2ORF2序列，命名为YHsfORF2。将YHsfORF2克隆、转染，获得重组杆状病毒vFBHYHsfORF2。密码子优化的ORF2基因能够在重组病毒中高效表达，并能形成病毒样颗粒。本发明还涉及该重组病毒在疫苗方面的应用，动物免疫保护试验表明该重组病毒灭活疫苗，可刺激机体产生高效的免疫应答，有效抑制PCV2在动物体内的复制，对PCV2感染有较好的免疫预防保护作用。

公开(公告)号：CN101948792B

公开(公告)日：2012-12-26

申请号：CN201010118490.7

申请日：2010-03-05

Applicant: 江苏省农业科学院

Inventor： 张雪寒 ,  何孔旺 ,  卢维彩 ,  赵攀登 ,  温立斌 ,  郭容利 ,  李彬 ,  王小敏 ,  倪艳秀 ,  吕立新 ,  周俊明 ,  俞正玉 ,  茅爱华 ,  周萍 ,  沈江萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/31 ,  C07K14/245 ,  A61K39/108 ,  A61K39/116 ,  A61P31/04

CPC classification number: Y02A50/472

Abstract: 本发明涉及肠出血性大肠杆菌O157:H7增强粘膜免疫多价融合型重组菌、重组蛋白制备方法及基因工程疫苗，属于生物制药领域。分别扩增出EHEC O157:H7的志贺毒素1和2的B亚基(Stx1B和Stx2B)、转位紧密素受体(Tir)，依次串联，克隆入表达载体pGEX-4T-1中，而后将霍乱弧菌封闭小带毒素(zot)串联其后，即获得重组质粒pGEX-4T-1-2b-tir-1b-zot，在BL21(DE3)获得高效表达。经过高密度发酵和一系列的纯化程序获得高纯度的融合蛋白分子疫苗。该疫苗的制备工艺简捷、易于放大、重复性好，所获得目标蛋白纯度较高，动物试验证明可刺激机体在体液免疫、细胞免疫和粘膜免疫方面产生高效的免疫应答，免疫预防保护和治疗作用。