公开(公告)号：CN113388536A

公开(公告)日：2021-09-14

申请号：CN202110621179.2

申请日：2021-06-03

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  杨海泉 ,  张坤杰 ,  刘万隆 ,  董田田 ,  沈微 ,  夏媛媛 ,  陈磊 ,  曹钰

IPC: C12N1/19 ,  C12N9/88 ,  C12N9/10 ,  C12N15/54 ,  C12N15/60 ,  C12N15/81 ,  C12P7/02 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了产西柏三烯一醇的酿酒酵母的构建方法及应用，属于代谢工程和微生物工程领域。本发明通过在酿酒酵母W303‑1A中异源表达西柏三烯一醇合成的2个关键酶香叶基香叶基焦磷酸合酶基因ggpps和西柏三烯醇合酶基因cbts，实现了西柏三烯一醇在酿酒酵母中的从头生产，并进一步通过与西柏三烯醇合酶基因cbts的串连过表达关键酶法尼基焦磷酸合成酶(ERG20)，获得的重组菌株的西柏三烯一醇产量显著提高。将上述途径构建至酿酒酵母BY4741中，其西柏三烯一醇的产量提高至对照菌株的3倍。在关键酶法尼基焦磷酸合成酶基因前添加启动子，进一步提高重组酿酒酵母的西柏三烯一醇产量。

公开(公告)号：CN112409464A

公开(公告)日：2021-02-26

申请号：CN202011322536.7

申请日：2020-11-23

Applicant: 江南大学

Inventor： 陈献忠 ,  杨海泉 ,  张坤杰 ,  马樱芳 ,  沈微 ,  夏媛媛 ,  陈磊

IPC: C07K14/32 ,  C12N15/75 ,  C12N15/62 ,  C12N1/21 ,  C12N9/26 ,  C12N9/16 ,  C12N9/56 ,  C12R1/125

Abstract: 本发明公开了一种提高枯草芽孢杆菌重组蛋白胞外生产水平的信号肽突变体及应用，属于基因工程技术领域。本发明通过对信号肽M1(MSDEQKKPE QIHRRDILKWGAMAGAAVA)的N端区域进行定向进化，筛选获得具有高效胞外分泌水平的信号肽突变体文库，通过该突变体文库构建获得系列重组蛋白胞外分泌水平显著提高的重组枯草芽孢杆菌菌株。将获得的正向信号肽突变体进行排列组合复合突变，获得具有高效重组蛋白表达分泌水平的信号肽复合突变体，利用其构建获得具有高效胞外蛋白胞外分泌水平的枯草杆菌杆菌突变株。本发明所筛选获得的信号肽突变体，对于重组蛋白在枯草芽孢杆菌中具有高效的胞外蛋白分泌水平，重组蛋白胞外分泌水平提高了15倍以上。本发明方法对信号肽改造及重组蛋白在宿主中的高效分泌与生产具有重要指导意义。