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公开(公告)号：CN111965094B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202010853561.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种比较体外诱导的PGC‑like细胞迁移效率的方法，属于生物技术领域。前期通过不同的诱导体系将ESCs或iPS细胞诱导分化形成PGC‑like细胞，将获得的PGC‑like细胞进行PKH26细胞膜表面标记，然后注射至孵化2.5天的受体鸡胚血管，封口后继续孵化至4.5天，分离鸡胚生殖嵴，进行冰冻切片后在荧光显微镜下观察红色荧光，并通过流式细胞术分析PKH26红色荧光的比例，从而比较不同体系诱导形成的PGC‑like细胞的迁移能力。结果发现能够明确对比出体外不同体系诱导的PGC‑like细胞的迁移能力的差异。本发明切实可靠，严谨准确，成效显著，为研究分析体外诱导的PGCs迁移归巢至生殖嵴的能力提供了一种新颖可行且高效的实验方法。
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公开(公告)号：CN113061651A
公开(公告)日：2021-07-02
申请号：CN202110376568.3
申请日：2021-04-08
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6869 , C12N15/85 , C12N5/10 , C12Q1/6897
Abstract: 本发明涉及一种LPS感染后检测并调控鸡RIPK2基因甲基化的方法，包括以下步骤：步骤1）、LPS感染鸡巨噬细胞HD11，检测RIPK2基因表达量变化；步骤2）、重亚硫酸氢盐处理LPS感染前后的基因组；步骤3）、鸡RIPK2基因启动子区CpG岛片段PCR扩增和测序分析；步骤4）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理转染鸡RIPK2启动子质粒的鸡HD11细胞；步骤5）、5‑氮杂胞苷和M.SssI分别处理鸡HD11细胞，检测RIPK2基因表达量；通过本发明，对缓解应激性病理损伤和提高家禽健康具有重要的实践意义。
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公开(公告)号：CN111850082A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010748580.8
申请日：2020-07-30
Applicant: 扬州大学
Abstract: 一种研究鸡生殖细胞自噬的方法，属于生物技术领域。在生殖细胞中添加雷帕霉素激活细胞自噬，转染不同MOI值的GFP-LC3慢病毒载体，在显微镜下观察细胞生长状态，排除MOI值过高导致细胞凋亡的分组。收集各组样品，EdU检测各组细胞的增殖效率，同时通过western-blot检测游离的GFP蛋白和自噬标志蛋白LC3-Ⅰ（16 ku）与LC3-Ⅱ（14 ku）之间的转化和比例及荧光显微镜定位LC3蛋白在细胞中的表达情况综合评判该MOI值在鸡生殖细胞中的适用性。本发明操作简单，切实可行，探讨GFP-LC3慢病毒载体在鸡生殖细胞中的转染条件是将为自噬在胚胎干细胞向原始生殖细胞的诱导分化中的作用研究奠定基础。
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公开(公告)号：CN111849918A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN202010723146.4
申请日：2020-07-24
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/867 , C12Q1/6888 , C12Q1/6869
Abstract: 一种鸡SSCs中受组蛋白甲基化调控的靶基因的方法，属于生物技术领域。该方法尝试将生物信息学和实验验证相结合，RNA-seq和CHIP-seq相结合，筛选出在鸡SSCs中受组蛋白甲基化调控的关键靶基因。采用本发明对组蛋白甲基化调控的靶基因进行的研究简单可靠，同时考虑到靶基因的保守性，为拓宽组蛋白甲基化在SSCs上的研究提供理论依据。
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公开(公告)号：CN111534481A
公开(公告)日：2020-08-14
申请号：CN202010416986.6
申请日：2020-05-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 一种提高鸡胚成纤维细胞体外诱导重编程为鸡iPS细胞效率的方法，属于生物技术领域。前期研究发现通过OSNL体系可将鸡CEF诱导重编程为iPS，但效率较低，在此基础上，研究体细胞诱导重编程过程中糖酵解代谢发挥的作用并对诱导体系进行进一步的优化。本发明操作简单，切实可行，应用广泛。由于鸡诱导多能干细胞具有发育的全能性，在适当条件下可被诱导分化为多种细胞组织，因此可作为一种新的干细胞来源，也为珍稀动物的保种、转基因动物的生产等研究开辟了新思路。本发明将小分子化合物和细胞代谢联系在一起，将为禽类体细胞诱导重编程研究提供了更多的理论基础和技术支撑，也有利于为家禽细胞和胚胎工程研究提供更多的实验材料。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN110272919A
公开(公告)日：2019-09-24
申请号：CN201910593462.1
申请日：2019-07-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12N15/867 , C12N15/66 , C12N5/10 , C12Q1/686
Abstract: 本发明提供一种寻找胚胎干细胞向原始生殖细胞分化过程中Wnt信号通路的靶基因的方法，涉及生物技术领域，本发明所述方法首先对Wnt信号通路的关键转录因子TCF7L2进行靶基因预测，对预测靶基因进行GO功能注释，筛选出其中共同参与生殖细胞发育及干细胞分化的保守性靶基因作为待选靶基因；通过体内外试验验证Wnt信号对待选靶基因转录水平的调控作用，检测待选靶基因的启动子中所述转录因子结合位点缺失时、Wnt信号对待选靶基因转录水平是否有调节作用，通过ChIP-qPCR验证β-Catenin/转录因子复合物与待选靶基因的结合作用，从而确定待选靶基因是否对Wnt信号具有靶向响应作用。本发明所述方法简单易行。
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公开(公告)号：CN119061119A
公开(公告)日：2024-12-03
申请号：CN202411227127.7
申请日：2024-09-03
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6809
Abstract: 本发明公开了一种筛选和研究调节鸡性别决定和分化关键因素功能的方法，通过构建E0‑E18.5的转录组文库，进一步分析性别决定和分化的关键因素，以期深入揭示性别决定的复杂机制。从转录水平上系统的阐述鸡性别决定过程中全基因组水平上的表达和转录情况，并结合小分子激活剂和抑制剂处理E18.5d性腺，通过观察性腺组织切片的形态学变化，qRT‑PCR检测性别相关基因的表达，ELISA检测性腺的性激素分泌变化，论证相关因素对于性别控制的影响，为鸡的性别决定机制的相关研究提供有力的参考，也为后续进一步验证能量代谢和表观遗传修饰在鸡性别决定和分化过程中的功能奠定基础。
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公开(公告)号：CN116855444A
公开(公告)日：2023-10-10
申请号：CN202310819378.3
申请日：2023-07-06
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种鸡原始生殖细胞单克隆细胞系建立的方法，属于畜牧学和生物技术领域；通过自制简易口吸管，用FAcs培养基对PGCs进行稀释，用口吸管分选单个PGCs，在5%CO2、饱和湿度的37℃培养箱中进行培养，每三天换一次培养液，建立PGCs的单克隆细胞系；本发明提供的方法可以在普通实验室高效稳定建立鸡PGCs单克隆细胞系，且不需要复杂昂贵的仪器，分选和建系效率高，为研究鸡PGCs生物学特性提供了一种新的途径，为家禽的良种扩繁、基因修饰及修饰后筛选、家禽分子设计育种和种质资源冷冻保存等提供了新的方法、奠定了实验基础。
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公开(公告)号：CN111650327B
公开(公告)日：2023-06-02
申请号：CN202010685235.4
申请日：2020-07-16
Applicant: 扬州大学
IPC: G01N30/88
Abstract: 本发明涉及一种基于非标定量蛋白质组学技术寻找如皋黄鸡不同细胞或组织间差异表达蛋白的方法，包括以下步骤：（1）鸡不同细胞或组织的组织或细胞蛋白提取；（2）对步骤（1）中得到的不同组的细胞或组织蛋白进行胰酶酶解；（3）酶解后的细胞或组织蛋白进行液相色谱‑质谱联用分析；（4）对分析结果进行数据库搜库和注释分析。通过本发明，本发明的优越性在于：1、本发明能够较快的获得不同组织和细胞之间的差异表达蛋白。2、方法简单可行，可重复性强，结果准确。3、该方法适用于其他物种。
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公开(公告)号：CN114015786A
公开(公告)日：2022-02-08
申请号：CN202111348108.6
申请日：2021-11-15
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6851 , G01N33/58 , G01N33/68 , G01N15/14
Abstract: 本发明涉及一种探究胚胎期肌肉细胞形成时间的方法,利用实时荧光定量PCR、流式细胞分析、间接免疫荧光等技术共同探索肌肉细胞形成时间，方法切实可行，可用以大量分析胚盘内肌肉细胞占多个细胞的比例，以及何时肌肉细胞形成并表达标记蛋白，对研究胚盘发育、肌肉细胞形成、建立肌肉细胞形成调控网络等有重要指导意义，极大地丰富了胚胎发育生物学研究；本发明可推广到采用不同种类家禽的胚胎期胚盘，分析胚盘内各种细胞何时形成并分化发育，为研究整体胚胎发育，解密遗传规律奠定基础；本发明鉴定方法更为简便、灵敏和高效，可以检测胚胎期基因和蛋白的微弱表达，能更加真实地反映目的细胞形成情况，也可以应用于其他禽类研究中。
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