一种外泌体miRNA的定量检测方法

    公开(公告)号:CN105063209A

    公开(公告)日:2015-11-18

    申请号:CN201510488030.6

    申请日:2015-08-10

    CPC classification number: C12Q1/6851 C12Q2525/191 C12Q2525/207 C12Q2535/122

    Abstract: 本发明提供了一种外泌体miRNA的定量检测方法,包括外泌体总RNA提取、3’端和5’端特异性唯一标签接头连接、反转录合成cDNA并进行PCR扩增、miRNA文库的筛选纯化与上机测序、纠错算法的信息分析等步骤。本发明方法基于特异性的唯一标签接头的标记,对每个原始模板进行区分,避免了扩增时分子间存在的偏好性,可以精确检测低于10拷贝以下的miRNA分子,且特异性高,可用于肿瘤源性的外泌体miRNA的检测,神经退行性疾病、心血管疾病,生育健康等领域的检测,可为疾病的早期筛查提供依据,还可应用于其他小RNA精准定量检测领域。具有广阔的应用前景和市场价值。

    一种外泌体miRNA的定量检测方法

    公开(公告)号:CN105063209B

    公开(公告)日:2017-12-12

    申请号:CN201510488030.6

    申请日:2015-08-10

    Abstract: 本发明提供了一种外泌体miRNA的定量检测方法,包括外泌体总RNA提取、3’端和5’端特异性唯一标签接头连接、反转录合成cDNA并进行PCR扩增、miRNA文库的筛选纯化与上机测序、纠错算法的信息分析等步骤。本发明方法基于特异性的唯一标签接头的标记,对每个原始模板进行区分,避免了扩增时分子间存在的偏好性,可以精确检测低于10拷贝以下的miRNA分子,且特异性高,可用于肿瘤源性的外泌体miRNA的检测,神经退行性疾病、心血管疾病,生育健康等领域的检测,可为疾病的早期筛查提供依据,还可应用于其他小RNA精准定量检测领域。具有广阔的应用前景和市场价值。

    一种脱落细胞DNA低频突变富集测序方法

    公开(公告)号:CN105132407A

    公开(公告)日:2015-12-09

    申请号:CN201510488017.0

    申请日:2015-08-10

    Abstract: 本发明提供了一种脱落细胞DNA的低频突变富集测序方法,包括脱落细胞DNA的提取与DNA的打断,样品DNA文库构建、通用文库TT-COLD PCR扩增富集、探针富集捕获、捕获产物PCR及上机测序、正反双链纠错低频信息分析步骤,具体为基于接头通用引物进行TT COLD PCR对所有类型变异实现第一级突变富集扩增;设计富集探针芯片,针对热点变异将人基因组参考序列hg19设计的探针替换为基于突变碱基设计的探针,其他位点探针不变,进行第二级富集捕获;文库构建中的插入DNA两端12bp自身序列作为标签进行正反双链纠错比对,提高数据利用率,实现低频精确检测,可以对0.01%低频变异具有高特异性检测。

    一种检测血浆cfDNA中BCR和TCR免疫组库的方法

    公开(公告)号:CN105087789B

    公开(公告)日:2018-08-03

    申请号:CN201510488029.3

    申请日:2015-08-10

    Abstract: 本发明提供了一种检测血浆cfDNA中BCR和TCR免疫组库的方法,包括以下步骤:血浆cfDNA提取、BCR H链的全长多重PCR扩增和TCRβ链CDR3多重PCR扩增、两种扩增产物等体积混合后再进行一次PCR扩增、高通量测序、免疫组库精准信息分析。上述三次PCR扩增的引物分别如SEQ ID NO.1‑28、SEQ ID NO.29‑77、SEQ ID NO.78‑79所示。本发明还提供了含有上述引物的检测血浆cfDNA中BCR和TCR的试剂盒。本发明方法以及试剂盒能够同时检测血浆cfDNA中BCR和TCR,实现精准信息分析和免疫组库各亚克隆的精确定量,在无创检测领域具有广阔的应用前景。

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