一种用于检测乳腺癌HER2拷贝数变异的数字PCR方法及检测试剂盒

    公开(公告)号:CN110616251A

    公开(公告)日:2019-12-27

    申请号:CN201910933145.X

    申请日:2019-09-29

    Inventor: 董莲华 王霞 王晶

    Abstract: 本发明公开了一种用于检测乳腺癌HER2拷贝数变异的数字PCR方法及检测试剂盒,所述试剂盒包括用于检测HER2基因拷贝数变异的至少一对引物及其相配套的一条探针,和用于检测的内参基因的一对引物及其相配套的一条探针。本发明的方法采用三组HER2基因的特异性引物探针和一组内参基因的方式进行,从而有效地排除了单一引物探针扩增导致的假阴性结果,因此相较于现有技术中具有更高的准确性,而且将现有方法的不确定区间1.8-2.2降低至1.0-1.2,具有更高的灵敏度。

    Illumina平台高通量测序文库定量标准物质的制备方法

    公开(公告)号:CN107447015A

    公开(公告)日:2017-12-08

    申请号:CN201710787170.2

    申请日:2017-09-04

    Abstract: 本发明公开了一种Illumina平台高通量测序文库定量标准物质的制备方法,将大肠杆菌基因组DNA经过超声波片断化,通过末端修复和接头连接,磁珠选择回收后可获得文库定量标准物质,再通过建立的染料数字PCR方法进行量值的确定。本发明提供了标准物质的制备方法,采用片段化的大肠杆菌基因组DNA作为文库定量标准物质,可以更好的模拟实际检测中样本的文库构建。本标准物质的定值方法准确度高,不依赖于DNA标准品,测量结果可溯源至个数,从而保证测量结果的可靠和可溯源。本标准物质可作为测量标准用于illumina平台高通量测序文库DNA的准确定量。

    一种纳米孔单分子测序平台电流补偿和频率跟随的方法

    公开(公告)号:CN119757716A

    公开(公告)日:2025-04-04

    申请号:CN202411897066.5

    申请日:2024-12-23

    Abstract: 本发明公开了一种纳米孔单分子测序平台电流补偿和频率跟随的方法。其是将纳米孔至于浓度不同的左右两个腔室中施加命令电压,命令电压会使生物单分子发生移动并穿过纳米孔,生物单分子的移动会使左右腔室内离子数量发生变化进而产生离子电流,纳米孔本身存在的杂散电容和寄生电容也会产生扰动电流,同时在命令电压的驱动下生物单分子的移动速度也会使传统电路跟随不上造成信号的丢失,该补偿方法和设计通过改变调节电路中接入阻值的变化来补偿扰动电流和频率。本发明能够有效调节纳米孔单分子测序信号检测时的扰动电流,及时跟随信号变化,不会产生信号丢失的现象,实现生物单分子的运动的精确控制,有助于DNA测序中单个碱基的重复测量。

    一种循环肿瘤DNA标准物质及其制备方法和定值方法

    公开(公告)号:CN119530348A

    公开(公告)日:2025-02-28

    申请号:CN202411763417.3

    申请日:2024-12-03

    Abstract: 本发明公开了一种循环肿瘤DNA标准物质及其制备方法和定值方法,其制备方法包括以下步骤:(1)细胞培养;(2)细胞核提取;(3)细胞核酶切;(4)片段化DNA的纯化;(5)取样本用nanodrop测量对样本进行定量;(6)取样本验证片段长度;(7)按照最终获得理论突变丰度为1%、5%、10%,将不同的ctDNA混合,配制得到标准物质。其定值方法为,通过双重标记的探针对样品进行数字PCR扩增,得到突变基因及野生基因的拷贝数浓度、或者目标基因及参照基因的拷贝数浓度,计算基因突变频率及扩增倍数。本发明方法得到了与ctDNA长度相似的片段化DNA;并通过磁珠法的两轮纯化,可以去除330bp及大片段,得到单一片段标准物质。

    一种用于评估逆转录效率的方法及其应用

    公开(公告)号:CN114657235B

    公开(公告)日:2023-09-01

    申请号:CN202210372220.1

    申请日:2022-04-11

    Abstract: 本发明提供了一种用于评估逆转录效率的方法。对所建立的或所使用的逆转录‑PCR定量方法的逆转录效率,提出一套基于同位素稀释质谱法的高准确度逆转录效率评估方案。首先通过逆转录数字PCR对目的基因的RNA进行拷贝数浓度的测定,再进一步通过同位素稀释质谱法来测定该目的基因的RNA拷贝数浓度,计算获得的两种RNA拷贝数浓度的比值,从而获得相应的逆转录体系的逆转录效率。通过对逆转录效率准确评估,修正逆转录PCR结果,从而获得目标RNA分子的准确含量,满足不同领域对RNA分子准确定值的需求。

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