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公开(公告)号：CN119530348A
公开(公告)日：2025-02-28
申请号：CN202411763417.3
申请日：2024-12-03
Applicant: 中国计量科学研究院
IPC: C12Q1/6806 , C12N15/10 , C12N5/09
Abstract: 本发明公开了一种循环肿瘤DNA标准物质及其制备方法和定值方法，其制备方法包括以下步骤：(1)细胞培养；(2)细胞核提取；(3)细胞核酶切；(4)片段化DNA的纯化；(5)取样本用nanodrop测量对样本进行定量；(6)取样本验证片段长度；(7)按照最终获得理论突变丰度为1％、5％、10％，将不同的ctDNA混合，配制得到标准物质。其定值方法为，通过双重标记的探针对样品进行数字PCR扩增，得到突变基因及野生基因的拷贝数浓度、或者目标基因及参照基因的拷贝数浓度，计算基因突变频率及扩增倍数。本发明方法得到了与ctDNA长度相似的片段化DNA；并通过磁珠法的两轮纯化，可以去除330bp及大片段，得到单一片段标准物质。
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