公开(公告)号：CN116814691A

公开(公告)日：2023-09-29

申请号：CN202310808237.1

申请日：2023-07-04

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西宁市动物疫病预防控制中心(挂西宁市畜牧兽医站牌子)

Inventor： 苏建民 ,  刘军 ,  赵逸凡 ,  张成图 ,  张迎冰 ,  吴英 ,  孟茹 ,  王淑琴 ,  张涌

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/10

Abstract: 本发明公开了提高epi‑BE4max介导GDF9基因靶位点编辑效率的方法。涉及细胞编辑技术领域。包括使用小分子化合物：NexturastatA与SB‑505124。本发明发现NexturastatA与SB‑505124小分子对GDF9基因G1与G4靶位点编辑效率具有促进作用，NexturastatA与SB‑505124小分子可提高藏绵羊成纤维细胞GDF9基因G1靶位点的编辑效率，其替换频率分别提高了48％与34％。NexturastatA与SB‑505124小分子可提高藏绵羊成纤维细胞GDF9基因G4靶位点的编辑效率，其替换频率分别提高了37％与36％。

公开(公告)号：CN115896227A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202211643365.7

申请日：2022-12-20

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘军 ,  张涌 ,  高元鹏 ,  祝振亮 ,  韩静

IPC: C12Q1/02 ,  G01N33/68 ,  C12Q1/6869 ,  C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/56

Abstract: 本发明公开了一种鉴定外源基因整合位点以增强转基因表达的方法，其方法包括如下步骤：首先从泌乳期和干奶期山羊乳腺组织中分离培养了乳腺上皮细胞，通过免疫染色检测乳腺上皮细胞中角蛋白8的表达，以确定细胞纯度，随后对乳腺上皮细胞进行ATAC‑seq和RNA‑seq；本发明通过筛选出可用于制备乳腺生物反应器的基因整合位点FAM13A，并在细胞水平上验证了该位点的有效性和安全性，将有助于在奶山羊乳腺生物反应器中生产重组蛋白。该增强转基因表达的方法，结合ATAC‑seq和RNA‑seq来筛选奶山羊泌乳期乳腺上皮细胞染色质特异性开放的区域，并利用CRISPR/Cas9将人溶菌酶基因整合到4个不同的开放区域，通过比较在不同打靶位点插入基因的表达水平，筛选出有利于转基因表达的整合位点FAM13A。

公开(公告)号：CN110305836B

公开(公告)日：2021-03-26

申请号：CN201910551341.0

申请日：2019-06-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  张景程 ,  王勇胜

IPC: C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种牛体外受精的受精液及其使用方法，受精液包括不含肌醇的SOF基础培养基，还包括以下添加剂：L‑精氨酸、L‑天冬氨酸、L‑肉碱、肾上腺素、青霉胺、亚牛磺酸、肝素。采用本发明的受精液，可有效保证牛胚胎体外受精率和受精胚胎的发育质量。

公开(公告)号：CN111944745A

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN202010858331.4

申请日：2020-08-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张景程 ,  黄玥萌 ,  张敏 ,  王德宝 ,  王永 ,  张涌

IPC: C12N5/075

Abstract: 本发明公开了一种无血清的牛卵母细胞体外成熟培养液及卵母细胞培养方法，属于细胞培养技术领域。本发明公开的一种无血清的牛卵母细胞体外成熟培养液，包括无Hepes的M199基础培养液、无脂肪酸BSA、HMG、17β-雌二醇、EGF、L-cysteine、bFGF、100xGlutamax、叶酸、胆酸、CXCL12。本发明公开的牛卵母细胞体外成熟培养液在不使用血清的情况下培养牛卵母细胞，提高了牛卵母细胞的成熟率，并有效提高体外受精胚胎和体细胞核移植胚胎的早期胚胎发育率。

公开(公告)号：CN111534479A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010387376.8

申请日：2020-05-09

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张景程 ,  黄玥萌 ,  张敏 ,  王德宝 ,  王永 ,  张涌

IPC: C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，属于家畜胚胎工程技术领域。本发明公开的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，包括SOF基础培养基，还包括以下添加剂：孕酮、维生素E、L-肉碱、FGF、皮质酮、瓜氨酸、EGF、IGF和LIF。本发明公开的一种提高牛体外受精胚和克隆胚的发育质量的培养液，可有效提高牛体外受精胚和体细胞克隆胚胎的发育率和发育质量。

公开(公告)号：CN110042123A

公开(公告)日：2019-07-23

申请号：CN201910307633.X

申请日：2019-04-17

Applicant: 西北农林科技大学 ,  西宁市畜牧兽医站

Inventor： 苏建民 ,  张涌 ,  张成图 ,  孙洪政 ,  陈永忠 ,  孟茹 ,  安全利 ,  程宇尧 ,  王勇胜 ,  权富生

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高牛体细胞克隆效率的方法，通过诱导表达zfp57基因使牛克隆胚胎发育过程中的印迹基因甲基化恢复正常水平，从而提高牛体细胞克隆效率。本发明提供的一种提高牛体细胞克隆效率的方法，利用zfp57纠正牛克隆胚胎上异常的印迹基因低甲基化，使其甲基化水平到达和体外受精胚胎接近的水平，从而提高牛克隆胚胎的胚胎质量，促进牛克隆胚胎的发育；为阐明体细胞克隆胚胎重编程过程中甲基化印迹异常的机理以及体细胞克隆效率低下的原因提供理论依据。

公开(公告)号：CN109679998A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910023959.X

申请日：2019-01-10

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 权富生 ,  葛陆星 ,  张涌 ,  杨佳姝 ,  康健 ,  董翔宸 ,  谢晓刚 ,  王勇胜

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/90 ,  C12N15/10 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种通过miRNA靶向定点突变MSTN基因并同时定点整合PPARγ基因的载体及重组细胞，载体包括Cas9切割表达载体和打靶载体。本发明将Cas9切割表达载体和打靶载体共同转染宿主细胞，构建重组细胞株，可以作为生产转基因克隆胚胎的核移植供体细胞，抑制MSTN的功能发挥，同时实现PPARγ在骨骼肌细胞中特异性表达，进而为快速、高效研制优质转基因肉牛新品种提供支撑。

公开(公告)号：CN109679976A

公开(公告)日：2019-04-26

申请号：CN201910008701.2

申请日：2019-01-04

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 刘旭 ,  郑小曼 ,  权富生 ,  张涌

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66

CPC classification number: C12N15/63 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明公开了一种可变剪接报告载体，在报告基因表达载体pEGFP-C1的报告基因序列内插入两段内含子序列intron1和intron2，intron1与intron2分别具有5’剪切位点，分支位点和3’剪切位点。并且公开了可变剪接报告载体的制备方法。根据RNA的剪接机制设计合成intron1和intron2，将intron1和intron2分别插入插入报告基因表达载体的报告序列，用以在细胞水平和活体水平检测可变剪接事件，含有剪接位点的内含子的插入便于转录后mRNA的正确拼接。

公开(公告)号：CN109628382A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910049351.4

申请日：2019-01-18

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  王永 ,  张敏 ,  张景程 ,  王勇胜

IPC: C12N5/073

Abstract: 本发明公开了一种提高牛体外受精胚的发育质量的培养液，培养液中包括以下添加剂：胰岛素‑转铁蛋白‑硒添加剂、β‑巯基乙醇、亚牛磺酸、1‑油酰基‑sn‑甘油‑3‑磷酸钠盐和红景天苷。并且公开了使用该培养液提高牛体外受精胚的发育质量的培养方法。应用本发明培养液及培养方法有效提高牛体外受精胚胎的发育率和发育质量。

公开(公告)号：CN107988257B

公开(公告)日：2019-02-01

申请号：CN201711322629.8

申请日：2017-12-12

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  刘军 ,  韩成全 ,  苏建民 ,  毛廷超 ,  王勇胜 ,  康健

IPC: C12N15/85 ,  C12N5/10 ,  C12N15/877 ,  C12N13/00

Abstract: 本发明公开了一种基于供体细胞DNA甲基化水平的修饰提高山羊克隆效率的载体、细胞和方法。本发明提供的载体包括阻遏蛋白TetR表达载体和含有操纵基因TetO的双向表达载体，在融合前将两者共转染到供体细胞中。筛选阳性转染的细胞，药物诱导表达山羊TET3，将TET3诱导表达的阳性细胞作为最终供体细胞，再将其注入到去核后的卵母细胞并进行电融合，挑选成功融合的山羊体细胞克隆胚培养。本发明可以有效的降低供体细胞的甲基化水平，纠正克隆胚胎中的异常高甲基化现象，从而显著提高后期山羊体细胞克隆胚胎的发育率和质量，可以高效地体外生产山羊体细胞克隆胚胎，胚胎移植后的克隆山羊的出生率也显著提高。