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公开(公告)号：CN109652446A
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201811586556.8
申请日：2018-12-24
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
Abstract: 本申请公开了一种先将片段进行融合然后转化构成载体的构建方法，包括以下步骤：A、提取待转化作物DNA；B、分别获得多种连锁基因表达盒；C、获取去除Hpt基因的pCAMBIA1300质粒的；D、各个表达盒的连接；E、融合片段与pCAMBIA1300-hpt-质粒的连接。进一步包括：构建双T-DNA载体，其中一个T-DNA区含有三连锁基因，另一个T-DNA区含有抗性基因，用于愈伤转化及植株再生阶段的筛选；所述三连锁基因分别为：DsRed基因、EAT1基因、ZmAA基因。本发明提供了一种基于DsRED荧光蛋白基因为报告基因的不含潮霉素抗性基因的工程菌株。本发明还提供了一种将片段进行融合，然后转化载体的一种实验新思路。
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公开(公告)号：CN109022468A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810734303.4
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
CPC classification number: C12N15/66 , A01H4/008 , C12N15/8205
Abstract: 本申请公开了一种植物愈伤组织的制备方法，包括：1)诱导：水稻种子去壳消毒后，将成熟胚接种于诱导培养基中，诱导胚性愈伤组织；2)侵染：将步骤1)所得愈伤组织与胚乳、芽分离，接种于农杆菌悬浮液中侵染，之后晾干待用；3)共培养：将晾干的愈伤组织转到共培养基中，培养至愈伤组织表面出现菌体；4)筛选：将共培养后的愈伤组织清洗后接种到筛选培养基中进行抗性筛选，获得抗性愈伤组织；5)分化：将获得的抗性愈伤组织接种到分化培养基上培养至分化出幼苗；6)生根：将幼苗接种到生根培养基上生根，并进行PCR检测，选择检测为阳性的植株作为转化得到的粳稻植株。
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公开(公告)号：CN108588268A
公开(公告)日：2018-09-28
申请号：CN201810733936.3
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本申请公开了一种水稻光敏雄性不育相关基因分子标记，所述分子标记总共有558个碱基。所述分子标记各个碱基数为：A：215个；C：102个；G：117个；T：124个。本发明尝试利用SSR方法对水稻光敏雄性不育进行分子标记，运用30条SSR引物对其进行标记分析，筛选到1条与水稻光敏雄性不育相关的引物SD13-600其余引物扩增的条带均不同程度出现均一化现象，多态性不够明显，对SD-13600进行克隆测序，获得了558bp的片段。因此，本发明为建立水稻分子标记辅助选择系统为有效利用不育资源，加快杂交品种选育的选育进程创造了条件。
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公开(公告)号：CN109006454A
公开(公告)日：2018-12-18
申请号：CN201810734305.3
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
Abstract: 本申请公开了一种通过杂交技术获取第三代保持系的方法，包括以下步骤：(1)以第三代保持为母本，待改造的普通常规品系为父本，杂交获得F1；(2)选取F1代红色种子种植后与待改良普通常规品系回交获得BC1种子；(3)种植BC1代红色种子，获得BC1植株；抽穗前分单株编号，取叶片提取DNA，利用分子辅助筛选含有不育基因eat的植株，之后继续进行回交；(4)重复步骤(3)，通常经过多代的回交和选择，回交至回交后代的遗传背景恢复轮回亲本的90％以上；(5)自交，该植株即为回交转育获得的新的第三代保持系。可同时对多个材料同时进行回交转育，最重要的是回交转育的结果具有可预见性，且试验周期较短。
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公开(公告)号：CN108977459A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810794442.6
申请日：2018-07-18
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
Abstract: 本申请公开了一种植株突变体的制备方法，包括以下步骤：T1.构建CRISPR/cas9基因敲除载体，敲除CYP78A13基因；T2.农杆菌转化；T3.基因敲除检测；T4.转基因植株表型鉴定。本发明植株突变体的制备方法方法，以水稻细胞核育性基因作为目标基因，利用CRISPR/cas9基因沉默进行基因敲除，基因沉默后丧失功能，细胞发育长成完整植株，但不具备发育成正常功能的花粉，并能够以此为研究对象，用于创制不育系。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN108977458A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810733939.7
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
Abstract: 本申请公开了一种植物转基因细胞制备方法，其连接体系包括：10XT4连接酶buffer 1μL；T4连接酶1μL；目的片段(35S启动子)2μL；pCAMBIA1300双元载体5μL；双蒸水定容到10μL；16℃条件下连个过夜。本发明方法可以在植物转基因初期可以观察到转基因是否成功的一种快捷的报告基因检测方法，为后续的高效率的阳性植株筛选提供了依据。
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公开(公告)号：CN108967180A
公开(公告)日：2018-12-11
申请号：CN201810734127.4
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
Abstract: 本申请公开了一种不育系突变体获取方法，利用现有的突变体，与其它品种进行杂交，以不育基因作为标记，进行后代的筛选，后代同时进行回交。每次回交均经过所述不育基因的检测。本发明方法解决了以往获取育性突变体时，创制周期长，无法批量的，同时获得多个不同品种类型的突变体的限制。本发明法简单，易操作，避免了EMS诱变的不确定性，也省去了基因编辑过程的繁琐，而且可以同时对多个水稻品种进行回交转育，极大的提高的育性突变体的获取效率，有利于第三代智能不育系的创制，加速第三代杂交水稻育种的应用。
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公开(公告)号：CN108950042A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810733938.2
申请日：2018-07-05
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
IPC: C12Q1/6895
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q2600/13 , C12Q2600/156
Abstract: 本申请公开了一种光敏雄性不育相关基因筛选方法，包括以下步骤：G1.选取水稻不育系籼型HS‑1与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各12～18株，苗期分别取单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；G3.PCR扩增；G4.获得的特异片段克隆；G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。本发明将常规水稻育种技术与分子标记辅助育种技术有机结合，创新具有育性稳定和综合性状优良光敏雄性不育水稻新种质资源。
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公开(公告)号：CN108949812A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810729315.8
申请日：2018-07-04
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
CPC classification number: C12N15/8289 , C12N15/8231
Abstract: 本申请公开了一种基于DTM1基因的转基因水稻不育系的培育方法，包括以下步骤：A、水稻基因表达盒DTM1的获得；B、tdTomato基因表达盒的获得；C、玉米特异性启动子Pg47的扩增；D、玉米花粉致死基因ZMAA1的扩增；E、各基因表达元件的连接。所述步骤E、各基因表达元件的连接，包括将完整的水稻DTM1基因引入到pCAMBIA1300载体上，再连接tdTomato基因表达元件、小麦花粉特异性启动子Pg47和玉米花粉致死基因ZMAA1到pCAMBIA1300载体上。本发明F1代杂合体在自交结实过程中遵循孟德尔分离定律，产生的后代既有能保持三连锁基因的杂合体，又有无育性的不育系。
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公开(公告)号：CN108949778A
公开(公告)日：2018-12-07
申请号：CN201810794443.0
申请日：2018-07-18
Applicant: 青岛袁策集团有限公司
CPC classification number: C07K14/415 , C12N15/8218 , C12N15/8289
Abstract: 本申请公开了一种普通核不育突变体的创制方法，包括以下步骤：T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体；T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞。所述T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体中，sgRNA序列设计如下：5’‑ggcaCACAATGGCTCCAGCATTCC‑3’5’‑AAACGGAATGCTGGAGCCATTGTG‑3’。本发明方法，以水稻细胞核育性基因作为目标基因，利用CRISPR/cas9基因沉默进行基因敲除，基因沉默后丧失功能，细胞发育长成完整植株，但不具备发育成正常功能的花粉，并能够以此为研究对象，用于创制不育系。
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