公开(公告)号：CN108929899A

公开(公告)日：2018-12-04

申请号：CN201810733937.8

申请日：2018-07-05

Applicant: 青岛袁策集团有限公司

Inventor： 张国栋 ,  刘佳音 ,  米铁柱 ,  李继明 ,  丁锦燕 ,  邵晓宇

IPC: C12Q1/6858

Abstract: 本申请公开了一种水稻不育基因筛选方法，包括以下步骤：G1.选取水稻不育系农垦58S与日本晴杂交组合的F2高可育和高不育单株各10～16株，苗期分别取单株的新鲜叶片，采用CTAB方法提取基因组DNA不育和可育基因池构建采用BSA法；G2.SSR标记采用水稻SSR随机引物；G3.PCR扩增；G4.获得的特异片段克隆；G5.利用筛选到的水稻光敏雄性育基因的SSR标记，对水稻材料进行SSR标记筛选。本发明为解析水稻光敏雄性不育的分子机理更好的利用水稻光敏雄性不育奠定基础。

公开(公告)号：CN109022468A

公开(公告)日：2018-12-18

申请号：CN201810734303.4

申请日：2018-07-05

Applicant: 青岛袁策集团有限公司

Inventor： 刘佳音 ,  米铁柱 ,  张国栋 ,  王亚菲 ,  邵晓宇 ,  丁锦燕

IPC: C12N15/66 ,  C12N15/82 ,  A01H4/00 ,  A01H5/00 ,  A01H6/46

CPC classification number: C12N15/66 ,  A01H4/008 ,  C12N15/8205

Abstract: 本申请公开了一种植物愈伤组织的制备方法，包括：1)诱导：水稻种子去壳消毒后，将成熟胚接种于诱导培养基中，诱导胚性愈伤组织；2)侵染：将步骤1)所得愈伤组织与胚乳、芽分离，接种于农杆菌悬浮液中侵染，之后晾干待用；3)共培养：将晾干的愈伤组织转到共培养基中，培养至愈伤组织表面出现菌体；4)筛选：将共培养后的愈伤组织清洗后接种到筛选培养基中进行抗性筛选，获得抗性愈伤组织；5)分化：将获得的抗性愈伤组织接种到分化培养基上培养至分化出幼苗；6)生根：将幼苗接种到生根培养基上生根，并进行PCR检测，选择检测为阳性的植株作为转化得到的粳稻植株。

公开(公告)号：CN108949778A

公开(公告)日：2018-12-07

申请号：CN201810794443.0

申请日：2018-07-18

Applicant: 青岛袁策集团有限公司

Inventor： 刘佳音 ,  米铁柱 ,  张国栋 ,  邹丹丹 ,  李继明 ,  丁锦燕 ,  刘鹏飞

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00

CPC classification number: C07K14/415 ,  C12N15/8218 ,  C12N15/8289

Abstract: 本申请公开了一种普通核不育突变体的创制方法，包括以下步骤：T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体；T2.利用农杆菌介导方法，将载体介导入胚性细胞中，从而获得育性基因被沉默的细胞。所述T1.利用基因敲除技术，构建基因敲除载体中，sgRNA序列设计如下：5’‑ggcaCACAATGGCTCCAGCATTCC‑3’5’‑AAACGGAATGCTGGAGCCATTGTG‑3’。本发明方法，以水稻细胞核育性基因作为目标基因，利用CRISPR/cas9基因沉默进行基因敲除，基因沉默后丧失功能，细胞发育长成完整植株，但不具备发育成正常功能的花粉，并能够以此为研究对象，用于创制不育系。