黔北麻羊FSHR基因单核苷酸多态性的检测方法

    公开(公告)号:CN104830987B

    公开(公告)日:2017-07-11

    申请号:CN201510244930.6

    申请日:2015-05-14

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明提供了一种黔北麻羊FSHR基因单核苷酸多态性的检测方法。本发明采用PCR‑SSCP技术及PCR产物直接测序法对FSHR基因多态性位点进行检测,以探寻FSHR基因多态性和表达量与产羔数之间的相关性,为进一步研究黔北麻羊繁殖性状的遗传机制提供依据。首次在黔北麻羊FSHR基因第10 外显子第1246bp发现C→A的碱基突变,BB基因型的产羔数与AA基因型和AB基因型差异显著(P﹤0.05),而AA、BB基因型之间差异不显著(P﹥0.05),即BB基因型的产羔数显著高于AA基因型和AB基因型。由此可知,FSHR基因是10 外显子位点的变异影响黔北麻羊的产羔数,该变异位点对产羔有显著的影响,因此在黔北麻羊育种中,可通过选择BB基因型作为提高产羔数的辅助选择依据。

    利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法

    公开(公告)号:CN103571941A

    公开(公告)日:2014-02-12

    申请号:CN201310341205.1

    申请日:2013-08-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法,包括以下步骤:构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体;对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板;配制启动子重组子/脂质体的混合物,对步骤2)获得的细胞进行转染;通过双荧光素酶报告基因对步骤3)获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测。本发明具有灵敏度高、检测速度快、费用低、不需使用放射性同位素等优点,使用的pGL3-Basic报告基因,因其无启动子和增强子,可通过荧光素酶报告基因的表达来检测插入启动子的启动活性,并且比较启动子的强弱,进而初步确定核心启动子区域。

    一种鞣花酸在制备促进山羊繁殖性状药物中的应用

    公开(公告)号:CN115844875A

    公开(公告)日:2023-03-28

    申请号:CN202211538527.0

    申请日:2022-12-01

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种鞣花酸在制备促进山羊繁殖性状药物中的应用,通过体外培养贵州黑山羊卵巢颗粒细胞,研究不同EA浓度对卵巢颗粒细胞增殖、迁移、抗氧化活性、繁殖标记基因、免疫基因和凋亡蛋白的影响,结果筛选出150μmol/L的EA是促进颗粒细胞中繁殖相关基因表达的最适浓度,在颗粒细胞中添加150μmol/L的EA能极显著抑制凋亡蛋白caspase3、caspase9的表达,调低bax/bcl2的比例,从而提高抗炎因子IL‑10、SOD2的表达量,抑制促炎因子IL‑8的表达,降低细胞生长过程中产生的ROS含量,抵抗细胞损伤,对黑山羊卵巢颗粒细胞有抗凋亡、抗氧化损伤、促繁殖的作用。

    利用双荧光素酶报告基因检测启动子活性的方法

    公开(公告)号:CN103382505A

    公开(公告)日:2013-11-06

    申请号:CN201310341425.4

    申请日:2013-08-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定核心启动子的方法,包括以下步骤:步骤1:构建含7段不同长度MSTN基因5′调控区片段的pGL3-basic-MSTNpro重组体;步骤2:进行目标细胞的培养和铺板;配制步骤1所述pGL3-basic-MSTNpro与脂质体的混合物,用海肾荧光素酶载体pRL-TK为内参,进行细胞共转染;步骤3:用双荧光素酶报告基因进行荧光素酶活性检测。

    利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法

    公开(公告)号:CN103571941B

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201310341205.1

    申请日:2013-08-07

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种利用双荧光素酶报告基因确定关岭牛MyoDⅠ基因核心启动子的方法,包括以下步骤:构建含关岭牛MyoDⅠ基因启动子全长片段和亚克隆片段的重组载体;对骨骼肌生长相关的细胞进行培养和铺板;配制启动子重组子/脂质体的混合物,对步骤2)获得的细胞进行转染;通过双荧光素酶报告基因对步骤3)获得的转染细胞进行双荧光素酶活性检测。本发明具有灵敏度高、检测速度快、费用低、不需使用放射性同位素等优点,使用的pGL3-Basic报告基因,因其无启动子和增强子,可通过荧光素酶报告基因的表达来检测插入启动子的启动活性,并且比较启动子的强弱,进而初步确定核心启动子区域。

    黔北麻羊FSHR基因单核苷酸多态性的检测方法

    公开(公告)号:CN104830987A

    公开(公告)日:2015-08-12

    申请号:CN201510244930.6

    申请日:2015-05-14

    Applicant: 贵州大学

    CPC classification number: C12Q1/6827 C12Q1/6888 C12Q2600/124 C12Q2600/156

    Abstract: 本发明提供了一种黔北麻羊FSHR基因单核苷酸多态性的检测方法。本发明采用PCR-SSCP技术及PCR产物直接测序法对FSHR基因多态性位点进行检测,以探寻FSHR基因多态性和表达量与产羔数之间的相关性,为进一步研究黔北麻羊繁殖性状的遗传机制提供依据。首次在黔北麻羊FSHR基因第10外显子第1246bp发现C→A的碱基突变,BB基因型的产羔数与AA基因型和AB基因型差异显著(P﹤0.05),而AA、BB基因型之间差异不显著(P﹥0.05),即BB基因型的产羔数显著高于AA基因型和AB基因型。由此可知,FSHR基因是10外显子位点的变异影响黔北麻羊的产羔数,该变异位点对产羔有显著的影响,因此在黔北麻羊育种中,可通过选择BB基因型作为提高产羔数的辅助选择依据。

    含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法

    公开(公告)号:CN104131019A

    公开(公告)日:2014-11-05

    申请号:CN201410383229.8

    申请日:2014-08-06

    Applicant: 贵州大学

    Abstract: 本发明公开了一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法,本发明采用4对5'端加磷的引物扩增不同长度的MyoDI基因启动子片段,与用高保真DNA聚合酶扩增出的不含启动子区的pEGFP-N3载体片段进行平末端连接,构建重组质粒。这种方法简便精确获得重组载体,与双酶切的方法比较具有不受酶切位点限制的优势,同时也不引入新的酶切位点,使实验结果更加符合单一变量的要求,实验结果更加可信。

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