公开(公告)号：CN103869081A

公开(公告)日：2014-06-18

申请号：CN201410094856.X

申请日：2014-03-16

Applicant: 贵州大学

Inventor： 许厚强 ,  张雯 ,  陈伟 ,  陈祥 ,  赵佳福 ,  桓聪聪

IPC: G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6811 ,  C12Q2531/113

Abstract: 本发明公开了一种基因启动子区转录因子结合位点的多通量筛选方法，本发明设计了1对引物用于扩增MYOD1基因5′调控区的启动子区片段，将胶回收产物用T-载体PCR产物克隆试剂盒构建含有目的片段的重组质粒，然后利用Promoter-BindingTFProfilingAssayI和NuclearExtractionKit（CatalogNumberSK-0001）进行MYOD1基因启动子区转录因子结合位点的筛选，便于对牛MYOD1基因启动子的调控方式及调控元件进行研究。本发明的方法具有灵敏度高、检测速度快、操作简单、同时筛选多种转录因子、不需使用放射性同位素等优点。

公开(公告)号：CN104131019A

公开(公告)日：2014-11-05

申请号：CN201410383229.8

申请日：2014-08-06

Applicant: 贵州大学

Inventor： 许厚强 ,  桓聪聪 ,  陈伟 ,  赵佳福 ,  张雯 ,  周迪

IPC: C12N15/64

Abstract: 本发明公开了一种含MyoDI基因启动子片段的重组质粒的构建方法，本发明采用4对5'端加磷的引物扩增不同长度的MyoDI基因启动子片段，与用高保真DNA聚合酶扩增出的不含启动子区的pEGFP-N3载体片段进行平末端连接，构建重组质粒。这种方法简便精确获得重组载体，与双酶切的方法比较具有不受酶切位点限制的优势，同时也不引入新的酶切位点，使实验结果更加符合单一变量的要求，实验结果更加可信。