公开(公告)号：CN102206631A

公开(公告)日：2011-10-05

申请号：CN201110054992.2

申请日：2011-03-08

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  李战伟 ,  杨涵江 ,  任刚 ,  王令 ,  张存芳 ,  张婷婷 ,  王瑞 ,  贾杰只 ,  雷洁 ,  李亚明 ,  支旭勃 ,  韩新艳 ,  辛颖

IPC: C12N15/11 ,  C12N15/10 ,  C12N15/70 ,  C40B50/06 ,  C40B20/04 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明一种开源方式筛选靶向结合人DYRK1A基因靶位点的锌指蛋白的方法，属于基因工程技术领域。该方法包括：(1)3个锌指蛋白库的构建；(2)报告载体和报告菌株的构建；(3)有效锌指库的筛选；(4)有效锌指库的连接、组装；(5)利用细菌双杂交原理筛选出具有较高特异性和亲和力的三锌指蛋白。本发明所述的方法具有获得的锌指蛋白特异性和亲和性较高，组装的锌指核酸酶有更高的效率的优点。

公开(公告)号：CN102367450A

公开(公告)日：2012-03-07

申请号：CN201110193102.6

申请日：2011-07-11

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  张婷婷 ,  辛颖 ,  杨涵江 ,  张志强 ,  徐坤 ,  王令

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/66 ,  A01K67/00

Abstract: 本发明是一种由PiggyBac转座子介导的诱导细胞永生化转基因载体、其构建方法及其应用，属于基因工程技术领域。所述载体为PB-rtTA-NIT-STP，是通过下述方法构建：LoxP-SV40P nco-IRES-tk-PolyA-LoxP基因表达盒的构建；将基因表达盒的扩增片段与PXL-Bccll连接，构建基本转基因载体PB-NIT；含有目的基因SV40T和p 53的转基因载体PB-NIT-STP的构建；含有Tet结合域rtTA的筛选载体PB-rtTA-NIT-STP的构建。本发明构建的转基因载体具有有效提高转基因效率、便于筛选的优点。

公开(公告)号：CN102174576A

公开(公告)日：2011-09-07

申请号：CN201110027367.9

申请日：2011-01-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张智英 ,  王令 ,  张婷婷 ,  李亚明 ,  李战伟 ,  任刚 ,  杨涵江 ,  张存芳 ,  雷洁 ,  王瑞 ,  麻丽霞

IPC: C12N15/861 ,  C12N9/22 ,  C12N15/85 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明一种由锌指核酸酶介导的哺乳动物内源基因定向敲除的方法和该锌指核酸酶及其表达载体，属于基因工程技术领域。其中所述的方法包括：(1)内源基因靶位点的选择；(2)构建穿梭载体pAdTrack-CMV-T2A；(3)制备重组ZFN腺病毒载体pAd-T2A-ZFN；(4)腺病毒包装，得到ZFN腺病毒；(5)步骤(4)得到的ZFN腺病毒转染哺乳动物细胞。本发明利用ZFN技术，使动物哺乳细胞基因突变效率达到13％，大大提高了内源基因的定向敲除效率。