公开(公告)号：CN102766653A

公开(公告)日：2012-11-07

申请号：CN201210210385.5

申请日：2012-06-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  李密杰 ,  刘栋 ,  蓝贤勇 ,  雷初朝

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/66

Abstract: 本发明一种质粒型腺病毒载体pAd-PPARGC1A及其构建方法，属于基因工程技术领域。构建方法是将秦川牛PPARGC1A基因插入pAdTrack-CMV穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-PPARGC1A。Pme I线性化后转化含有pAdEasy-l腺病毒骨架质粒的E.coli BJ5183感受态细菌，利用E.coli BJ5183内源Cre重组酶的高效同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-PPARGC1A与pAdEasy-1的同源重组。将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-PPARGC1A。pAd-PPARGC1A经Pac I线性化后暴露反向的末端重复序列，脂质体转染HEK-293A细胞后产生重组病毒颗粒。本发明具有保证重组腺病毒载体的生物安全性、促进该基因的高效表达和利于后续检测该基因的表达的优点。

公开(公告)号：CN103205462A

公开(公告)日：2013-07-17

申请号：CN201210525343.0

申请日：2012-12-09

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  黄永震 ,  孙雨佳 ,  展召阳 ,  李密杰 ,  蓝贤勇 ,  雷初朝

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/66 ,  C12Q1/68 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明一种质粒型腺病毒载体pAd-IGF2及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。所述质粒型腺病毒载体pAd-IGF2的构建方法包括：(1)将秦川牛IGF2基因插入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-IGF2；(2)Pme Ⅰ线性化后转化含有pAdEasy-l质粒的E.col iBJ5183感受态细胞，利用E.coli BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-IGF2和pAdEasy-1的同源重组；将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-IGF2；(3)pAd-IGF2经Pac Ⅰ酶切线性化后，脂质体转染293A细胞和秦川牛原代肌肉细胞，产生并获得重组病毒颗粒。本发明的质粒型腺病毒载体pAd-IGF2具有可应用于秦川牛IGF2基因功能研究、鉴定和对种子细胞进行改造，调控肌肉生长发育相关基因的代谢。

公开(公告)号：CN102399819B

公开(公告)日：2013-06-19

申请号：CN201110244070.8

申请日：2011-08-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  刘栋 ,  马伟 ,  李密杰 ,  蓝贤勇 ,  潘传英

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/66

Abstract: 构建含秦川牛NRIP1(nuclear receptor interacting protein 1)基因的重组腺病毒载体，可应用于秦川牛NRIP1基因功能研究、鉴定和对种子细胞进行改造，调控肌肉、脂肪、生殖等组织相关基因的代谢。方法是将秦川牛NRIP1基因插入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-NRIP1。PmeI线性化后转化含有pAdEasy-1质粒的E.coli BJ5183感受态细胞，利用E.coli BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-NRIP1和pAdEasy-1的同源重组。将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-NRIP1。pAd-NRIP1经PacI酶切线性化后，脂质体转染293A细胞产生并获得重组病毒颗粒。

公开(公告)号：CN102888451B

公开(公告)日：2016-05-04

申请号：CN201210124717.8

申请日：2012-04-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  李密杰 ,  刘梅 ,  刘栋 ,  蓝贤勇 ,  雷初朝

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种检测黄牛PPARGC1A基因单核苷酸多态性的方法，以包含PPARGC1A基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛PPARGC1A基因，再进行琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物片段大小；然后进行SSCP多态性的检测。该方法是一种在DNA水平上筛查和检测与黄牛生长性状密切相关的分子遗传标记，故本发明提供的检测方法可用于中国黄牛肉用和生长性状的分子标记辅助选择，进而快速建立遗传资源优良的黄牛种群。

公开(公告)号：CN102888451A

公开(公告)日：2013-01-23

申请号：CN201210124717.8

申请日：2012-04-25

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  李密杰 ,  刘梅 ,  刘栋 ,  蓝贤勇 ,  雷初朝

IPC: C12Q1/68

Abstract: 本发明公开了一种检测黄牛PPARGC1A基因单核苷酸多态性的方法，以包含PPARGC1A基因的待测黄牛全基因组DNA为模板，以引物对P为引物，PCR扩增黄牛PPARGC1A基因，再进行琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物片段大小；然后进行SSCP多态性的检测。该方法是一种在DNA水平上筛查和检测与黄牛生长性状密切相关的分子遗传标记，故本发明提供的检测方法可用于中国黄牛肉用和生长性状的分子标记辅助选择，进而快速建立遗传资源优良的黄牛种群。

公开(公告)号：CN102399819A

公开(公告)日：2012-04-04

申请号：CN201110244070.8

申请日：2011-08-24

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 陈宏 ,  刘栋 ,  马伟 ,  李密杰 ,  蓝贤勇 ,  潘传英

IPC: C12N15/861 ,  C12N15/66

Abstract: 构建含秦川牛NRIP1(nuclear receptor interacting protein 1)基因的重组腺病毒载体，可应用于秦川牛NRIP1基因功能研究、鉴定和对种子细胞进行改造，调控肌肉、脂肪、生殖等组织相关基因的代谢。方法是将秦川牛NRIP1基因插入pAdTrack-CMV腺病毒穿梭质粒的CMV启动子之下，构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV-NRIP1。PmeI线性化后转化含有pAdEasy-1质粒的E.coli BJ5183感受态细胞，利用E.coli BJ5183内Cre重组酶高效的同源重组系统，在细菌中完成pAdTrack-CMV-NRIP1和pAdEasy-1的同源重组。将正确的重组腺病毒质粒命名为pAd-NRIP1。pAd-NRIP1经PacI酶切线性化后，脂质体转染293A细胞产生并获得重组病毒颗粒。