一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用

    公开(公告)号:CN114561447A

    公开(公告)日:2022-05-31

    申请号:CN202210248299.7

    申请日:2022-03-14

    Abstract: 本发明提供了一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用,所述单细胞全基因组的扩增方法包括以下步骤:(1)采用核酸切刻内切酶处理扩增模板,使用恒温扩增酶进行恒温扩增,得到单链DNA;(2)纯化步骤(1)所得的单链DNA,使用DNA聚合酶和随机引物扩增形成互补链。所述单细胞全基因组的扩增方法能够兼顾高保真性和均一性,且能同时满足SNP和CNV的分析需求。所述单细胞全基因组的扩增方法的酶切速率高,在切口的同时进行等温扩增,扩增效率高,扩增产物的产量大;扩增反应条件为恒温条件,对仪器的要求低,使用操作简单快捷,方法易于推广。

    一种构建CNV检测文库的方法及CNV检测方法

    公开(公告)号:CN114457143B

    公开(公告)日:2024-07-09

    申请号:CN202210258037.9

    申请日:2022-03-16

    Abstract: 本发明公开了一种构建CNV检测文库的方法及CNV检测方法。所述方法包括:采用双核酸内切酶组合对样本基因组DNA进行切割得到酶切产物,将所述酶切产物与测序接头连接,得到连接产物;对所述连接产物进行PCR扩增,得到测序文库,所述双核酸内切酶组合包括MboI、MseI、BfaI或ApoI‑HF中任意2种的组合。本发明的文库构建方法,能够用较少的数据量(测序成本)对全基因组部分代表性区域进行高深度测序,获得高密度和覆盖均一的足量能进行CNV分析的SNP位点。通过CNV组合分析策略实现同时对多种CNV变异类型的检测,包括染色体非整倍体、重复缺失、单倍体、三倍体、多倍体、LOH、UPD等。

    一种一体化文库构建的方法及其应用

    公开(公告)号:CN117683853A

    公开(公告)日:2024-03-12

    申请号:CN202311681283.6

    申请日:2023-12-08

    Abstract: 本发明公开了一种一体化文库构建的方法及其应用。所述方法包括:使用第一核酸内切酶和第二核酸内切酶对基因组DNA进行酶切得到酶切产物,将酶切产物与测序接头连接,得到连接产物,将筛选后的连接产物与多重PCR扩增得到的扩增子库混合,使用引物进行文库PCR反应,即得所述一体化核酸文库;所述第一核酸内切酶包括BfaI;所述第二核酸内切酶包括MboI;所述多重PCR扩增子库由一端含有BfaI酶切位点识别序列,另一端含有MboI酶切位点识别序列的DNA片段组成。本发明方法实现了在均匀覆盖全基因组CNV和SNP的同时,对漏检遗传病区域进行针对性的捕获富集,提供了一种更完善和准确的一体化高通量测序检测方法。

    一种捕获引物及其应用
    6.
    发明公开

    公开(公告)号:CN114507728A

    公开(公告)日:2022-05-17

    申请号:CN202210204628.8

    申请日:2022-03-03

    Abstract: 本发明公开了一种捕获引物及其应用。所述捕获引物自5’端起依次包括测序接头、随机序列和酶切位点。本发明中以酶切位点的分析作为核心要素,结合PCR引物易于设计改造和灵活多变的特点,将酶切识别位点引用到PCR引物的3’末端,从而创造出一种不依赖限制性内切酶的简化基因组测序技术,同时,在引物设计时在其5’末端加入相应的测序接头序列,通过简单的PCR扩增步骤即可获得直接能进行二代测序的文库,整个实验流程简单快速易于操作。

    一种捕获引物及其应用
    8.
    发明授权

    公开(公告)号:CN114507728B

    公开(公告)日:2024-03-22

    申请号:CN202210204628.8

    申请日:2022-03-03

    Abstract: 本发明公开了一种捕获引物及其应用。所述捕获引物自5’端起依次包括测序接头、随机序列和酶切位点。本发明中以酶切位点的分析作为核心要素,结合PCR引物易于设计改造和灵活多变的特点,将酶切识别位点引用到PCR引物的3’末端,从而创造出一种不依赖限制性内切酶的简化基因组测序技术,同时,在引物设计时在其5’末端加入相应的测序接头序列,通过简单的PCR扩增步骤即可获得直接能进行二代测序的文库,整个实验流程简单快速易于操作。

    一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用

    公开(公告)号:CN114561447B

    公开(公告)日:2024-03-15

    申请号:CN202210248299.7

    申请日:2022-03-14

    Abstract: 本发明提供了一种单细胞全基因组的扩增方法及其应用,所述单细胞全基因组的扩增方法包括以下步骤:(1)采用核酸切刻内切酶处理扩增模板,使用恒温扩增酶进行恒温扩增,得到单链DNA;(2)纯化步骤(1)所得的单链DNA,使用DNA聚合酶和随机引物扩增形成互补链。所述单细胞全基因组的扩增方法能够兼顾高保真性和均一性,且能同时满足SNP和CNV的分析需求。所述单细胞全基因组的扩增方法的酶切速率高,在切口的同时进行等温扩增,扩增效率高,扩增产物的产量大;扩增反应条件为恒温条件,对仪器的要求低,使用操作简单快捷,方法易于推广。

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