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    P450sca‑2酶突变体、其制备方法和应用
    6.
    发明授权
    P450sca‑2酶突变体、其制备方法和应用 有权

    公开(公告)号：CN103898071B

    公开(公告)日：2017-04-12

    申请号：CN201210566984.0

    申请日：2012-12-24

    申请人： 清华大学

    发明人： 林章凛 ,  巴丽娜 ,  李盼 ,  张晖 ,  段妍

    IPC分类号： C12N9/02 ,  C12N15/53 ,  C12N15/63 ,  C12N1/21 ,  C12N1/19 ,  C12P7/62

    摘要： 本发明涉及一种分离的多肽，其是SEQ ID NO:1所示的P450sca‑2酶的变体或所述变体的生物学活性片段，其中所述多肽在对应于SEQ IDNO:1所示序列中的G52、F89、P159、D269、T323和E370位置上包括氨基酸取代，而且相对于SEQ ID NO:1所示的P450sca‑2酶，所述多肽在宿主细胞中表达时赋予所述宿主细胞提高的在含十氢萘环化合物的十氢萘环的6β位引入羟基的能力。本发明还涉及编码上述分离的多肽的多核苷酸，包含所述多核苷酸的重组载体，包含所述多核苷酸或所述重组载体的宿主细胞，以及通过所述宿主细胞转化美伐他汀以制备普伐他汀的方法。本发明的方法可以提高从美伐他汀转化制备普伐他汀的产率。

    基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用
    7.
    发明授权
    基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用 失效

    公开(公告)号：CN103757042B

    公开(公告)日：2016-03-02

    申请号：CN201410019182.7

    申请日：2014-01-15

    申请人： 华南理工大学 ,  清华大学

    发明人： 李爽 ,  杨晓锋 ,  林章凛 ,  王菊芳 ,  王小宁

    IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N9/78 ,  C12N11/10 ,  C12P7/42

    CPC分类号： Y02P20/588

    摘要： 本发明公开了一种基于自聚集短肽诱导的固定化腈水解酶及制备方法和应用，制备方法如下：（1）将连接肽与自聚集短肽拼接，构建得到表达载体；（2）将腈水解酶基因与上述表达载体连接，转化入受体菌，获得工程菌；（3）上述工程菌诱导表达后，对细胞进行破壁处理，离心和/或过滤获得沉淀，即腈水解酶体内酶聚集体；（4）将得到的腈水解酶体内酶聚集体在海藻酸盐中固定化，得到固定化腈水解酶。本发明固定化所得腈水解酶聚集体，固定化酶颗粒直径约1mm。该固定化该颗粒可以冻干保存，在37oC情况下保存20天，酶活保留90%，而且固定化的腈水解酶酶活性高，操作流程简单。

    头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用
    8.
    发明授权
    头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用 有权

    公开(公告)号：CN102321603B

    公开(公告)日：2013-03-27

    申请号：CN201110297894.1

    申请日：2011-09-30

    申请人： 清华大学

    发明人： 林章凛 ,  肖瀛洲 ,  张艳 ,  马敦超

    IPC分类号： C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C12P35/00 ,  C12R1/19

    摘要： 本发明公开了一种头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用。本发明提供了的蛋白，为如下1)-3)中的任一一种：1)序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白；2)序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白；3)将序列表中序列3或序列4的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有头孢菌素酰化酶功能的由1)衍生的蛋白。本发明的实验证明，本发明提供了一种野生型CPC酰化酶变体，通过HPLC结果表明本发明的野生型CPC酰化酶变体与野生型酶相比，对CPC的比活可提高6.5倍。在一步法转化中，在3h内，转化率达到98％以上。

    头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用
    9.
    发明公开
    头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用 有权

    公开(公告)号：CN102321603A

    公开(公告)日：2012-01-18

    申请号：CN201110297894.1

    申请日：2011-09-30

    申请人： 清华大学

    发明人： 林章凛 ,  肖瀛洲 ,  张艳 ,  马敦超

    IPC分类号： C12N9/80 ,  C12N15/55 ,  C12N15/63 ,  C12N5/10 ,  C12N1/21 ,  C12P35/00 ,  C12R1/19

    摘要： 本发明公开了一种头孢菌素酰化酶突变体及其编码基因与应用。本发明提供了的蛋白，为如下1)-3)中的任一一种：1)序列表中序列4所示的氨基酸序列组成的蛋白；2)序列表中序列3所示的氨基酸序列组成的蛋白；3)将序列表中序列3或序列4的氨基酸残基序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有头孢菌素酰化酶功能的由1)衍生的蛋白。本发明的实验证明，本发明提供了一种野生型CPC酰化酶变体，通过HPLC结果表明本发明的野生型CPC酰化酶变体与野生型酶相比，对CPC的比活可提高6.5倍。在一步法转化中，在3h内，转化率达到98％以上。

    基于自聚集短肽诱导的酶聚集体的蛋白质纯化方法
    10.
    发明公开
    基于自聚集短肽诱导的酶聚集体的蛋白质纯化方法 有权

    公开(公告)号：CN102226172A

    公开(公告)日：2011-10-26

    申请号：CN201110118873.9

    申请日：2011-05-09

    申请人： 清华大学

    发明人： 林章凛 ,  邢磊 ,  吴伟

    IPC分类号： C12N9/50 ,  C12N9/42 ,  C12N9/20 ,  C12N9/06 ,  C12N15/70 ,  C12N15/74 ,  C12N15/80 ,  C12N15/62 ,  C12R1/19 ,  C12R1/125

    摘要： 本发明提供了一种基于自聚集短肽诱导的酶聚集体的蛋白质纯化方法，其是将目的蛋白、含可切割位点的肽段(优选为内含肽)以及具有自聚集功能的短肽按从左至右或从右之左的顺序融合表达为三联体，在表达过程中形成酶聚集体，可通过离心或过滤方法与细胞裂解液中大部分可溶杂质分离；之后通过诱导可切割位点处的切割将目的蛋白从聚集体释放到溶液中，从而达到纯化目的。该方法具有成本低，流程简单的特点，可用于实验室规模的高通量蛋白纯化，也有利于工业规模的蛋白生产。