一种高通量水产养殖抗生素抗性基因的定量检测方法

    公开(公告)号:CN112501325A

    公开(公告)日:2021-03-16

    申请号:CN202011445483.8

    申请日:2020-12-09

    摘要: 一种高通量水产养殖抗生素抗性基因的定量检测方法,包括水产养殖样本的采集,处理、核酸抽提、标准品构建及标准曲线绘制、高通量qPCR检测和数据处理,四环素抗生素抗性基因包括tetA、tetB、tetC、tetD、tetE、tetH、tetL、tetM、tetO、tetQ、tetS、tetW、tetX、tetBP等14种;14种标准品构建过程:(1)通过PCR反应扩增出耐药基因的DNA片段;(2)切胶回收耐药基因的普通PCR产物;(3)PCR产物一代测序,并与NCBI数据库比对,比对确定是相对应的基因再进行下一步;(4)将回收的普通PCR产物与克隆载体连接成环状质粒,转化至感受态细菌进行克隆,通过质粒携带的抗性基因筛选出阳性克隆子,分离纯化后提取质粒;(5)对质粒插入片段进行一带测序,跟(3)的序列进行比对,吻合即为该基因的质粒标准品。

    一种河口及近岸海洋环境中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分离筛选及抗生素抗性评估方法

    公开(公告)号:CN105112497A

    公开(公告)日:2015-12-02

    申请号:CN201510567031.X

    申请日:2015-09-08

    IPC分类号: C12Q1/10 C12Q1/14 C12Q1/04

    摘要: 本发明公开了一种河口及近岸海洋环境中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分离筛选及抗生素抗性评估方法。本方法是通过在MI琼脂与VJ琼脂中浸入筛选抗生素(四环素、磺胺、喹诺酮等)制成敏感的特异性选择琼脂,快速分离并计数河口及近岸海洋环境中抗生素抗性大肠杆菌(E.coli)与金黄色葡萄球菌(S.aureus),进而评估其抗性水平。本发明的河口及近岸海洋环境中大肠杆菌、金黄色葡萄球菌分离筛选及抗生素抗性评估方法具有操作简便易行,准确率高,安全环保的优点,适用于近岸海洋、河口、及入海排污口水体与沉积物样品中大肠杆菌与金黄色葡萄球菌的快速分析及抗生素抗性水平检测。