公开(公告)号：CN109207635B

公开(公告)日：2021-10-22

申请号：CN201811091220.4

申请日：2018-09-19

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 王晓杜 ,  宋厚辉 ,  吴瑗 ,  周莹珊 ,  陈琳 ,  刘正奎 ,  邵春艳 ,  章先 ,  程昌勇 ,  姜胜 ,  孙静 ,  周彬 ,  宋泉江

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种检测猪病毒性繁殖障碍症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括：反转录和预扩增混合液：反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～12所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；多重连接探针混合液：其中探针的序列如SEQ ID NO：13～24所示，通用引物的序列如SEQ ID NO：25～26所示；MLPA缓冲液；连接缓冲液A和B；连接酶Ligase‑65；PCR反应混合液，其包括序列SEQ ID NO：25～26所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照，包含六种猪病毒性繁殖障碍症候群的病毒CSFV、PRV、JEV、PRRSV、PCV2、PPV的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。

公开(公告)号：CN109097499A

公开(公告)日：2018-12-28

申请号：CN201811091219.1

申请日：2018-09-19

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 王晓杜 ,  宋厚辉 ,  吴瑗 ,  周莹珊 ,  邵春艳 ,  章先 ,  程昌勇 ,  姜胜 ,  孙静 ,  周彬 ,  宋泉江

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种用于检测PEDV-TGEV核酸的双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒。(1)反转录和荧光定量RT-PCR扩增混合液：该混合液包含反转录和荧光定量扩增引物以及探针，其序列如SEQ ID NO：1～6所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)阴性对照；(3)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。

公开(公告)号：CN107034236A

公开(公告)日：2017-08-11

申请号：CN201710356084.6

申请日：2017-05-19

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 王晓杜 ,  宋厚辉 ,  邵春艳 ,  何海建 ,  王鲁彦 ,  孙静 ,  李群景 ,  姜胜 ,  周莹珊 ,  吴媛

IPC: C12N15/866 ,  C12N15/50 ,  C07K14/165

CPC classification number: C12N15/86 ,  C07K14/005 ,  C12N2710/14043 ,  C12N2770/20022 ,  C12N2800/22

Abstract: 本发明属于微生物技术领域，旨在提供一种利用杆状病毒表达系统制备猪流行腹泻病毒S1蛋白的方法。包括以下步骤：PEDV的S1基因克隆和密码子的优化；构建PEDV‑S1基因重组杆状病毒表达载体；表达重组PEDV‑S1蛋白的杆状病毒包装和传代；优化表达重组PEDV‑S1蛋白的病毒在sf9细胞表达条件；纯化重组PEDV‑S1蛋白。本发明安全性较高，不存在PEDV弱毒返强的风险；具有天然构象，具有较好的模拟PEDV病毒的免疫原作用；高滴度的免疫原，方便注射或者口服给药。

公开(公告)号：CN118957161A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411358497.4

申请日：2024-09-27

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 周兴东 ,  宋厚辉 ,  王晓杜 ,  朱伟群 ,  周莹珊 ,  董婉玉 ,  杜静 ,  赵爽爽

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6851 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及病毒检测技术，旨在提供一种用于TaqMan荧光定量PCR法检测猪痘病毒的试剂盒。包括：反应总体积1/2的2×Premix Ex Taq酶；浓度各为10μmol/L的上游引物和下游引物；该两条引物的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示，用于在PCR扩增过程中特异性扩增猪痘病毒中央编码区外围C20L‑C1L序列中的ORF16基因；浓度为10μmol/L的探针，其核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示；标准阳性模版，其浓度按定量标准曲线制备的要求系列稀释；余量为无菌双蒸水。本发明基于对病毒靶向基因的核苷酸进行检测，操作简便、快速；特异性好，灵敏度高。由于不受培养条件限制定量检测，能真实反映猪痘病毒发生感染的情况；可对猪痘病毒进行快速定量检测，适于在临床实验室广泛推广应用。

公开(公告)号：CN116773807A

公开(公告)日：2023-09-19

申请号：CN202310547270.3

申请日：2023-05-16

Applicant: 浙江农林大学 ,  杭州市临安区畜牧农机发展中心

Inventor： 周莹珊 ,  张聚民 ,  宋厚辉 ,  王晓杜 ,  倪语晨 ,  于浩然

IPC: G01N33/569 ,  G01N33/543 ,  G01N33/533 ,  G01N33/577 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种利用时间分辨荧光免疫探针检测非洲猪瘟病毒的方法。该方法包括：制备羧基化聚苯乙烯纳米微球，将其与三氯化铕、三氯化铽、β‑二酮体类螯合物和荧光增强协同剂混合反应，制得纳米荧光微球；在此基础上利用非洲猪瘟病毒单克隆抗体制备纳米微球时间分辨荧光‑非洲猪瘟病毒探针，利用鼠lgG单克隆抗体和所述第二混悬液，制备纳米微球时间分辨荧光‑鼠lgG探针，分别进行冻干处理；将其用于时间分辨荧光免疫探针检测。本发明提供的检测方法检测灵敏度高、重复性好；检测范围广；检测稳定可靠，样品添加回收率高；操作简便易行，拥有良好的商业化应用前景。

公开(公告)号：CN115927753A

公开(公告)日：2023-04-07

申请号：CN202211251397.2

申请日：2022-10-13

Applicant: 浙江农林大学 ,  宁波海关技术中心

Inventor： 宋厚辉 ,  周莹珊 ,  赵秀玲 ,  倪健波 ,  王晓杜 ,  董婉玉 ,  于浩然 ,  杨杨 ,  姜胜 ,  邵春艳 ,  杨永春 ,  陈绵绵 ,  程昌勇 ,  王建峰

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/6813 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种能检测多种猪呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒包括：预扩增引物混合液，所含预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～14所示；探针混合液，包括左侧探针和右侧探针，序列如SEQ ID NO：15～28所示；MLPA缓冲液；连接缓冲液A；连接缓冲液B；连接酶Ligase‑65；PCR反应混合液，其包括如序列SEQ ID NO：29和30所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照。本发明具备高通量、特异性好、灵敏度高的特点；操作更简便，检测时间更短。

公开(公告)号：CN109706269B

公开(公告)日：2022-07-01

申请号：CN201910109233.8

申请日：2019-02-06

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 周莹珊 ,  邵春艳 ,  宋厚辉 ,  王晓杜 ,  陈琳 ,  姜胜 ,  宋泉江 ,  周彬 ,  杨杨 ,  杨永春 ,  孙静 ,  程昌勇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒中包括：预扩增引物混合液，含有序列如SEQ ID NO：1～14所示预扩增引物；探针混合液，含有序列如SEQ ID NO：15～28所示的左侧探针和右侧探针；MLPA缓冲液；连接缓冲液A；连接缓冲液B；连接酶Ligase‑65；PCR反应混合液，含有序列SEQ ID NO：29和30所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照。本发明所述试剂盒具有高通量特点，能同时检测7种病原，利用全自动核酸分析仪，每次可同时检测96个样品，为病原体的鉴别诊断和应急诊断提供高通量检测技术。另外，还具备特异性好和灵敏度高的优点，通过增加RT‑PCR步骤对目标基因进行富集，最低可检出1拷贝的目标基因。

公开(公告)号：CN109161613B

公开(公告)日：2021-10-22

申请号：CN201811091224.2

申请日：2018-09-19

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 王晓杜 ,  宋厚辉 ,  何海健 ,  周莹珊 ,  刘正奎 ,  陈琳 ,  邵春艳 ,  章先 ,  程昌勇 ,  姜胜 ,  孙静 ,  周彬 ,  宋泉江

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种检测猪病毒性腹泻症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括：(1)反转录和预扩增混合液：反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～12所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)多重连接探针混合液：其中，探针的序列如SEQ ID NO：13～24所示，通用引物的序列如SEQ ID NO：25～26所示；(3)MLPA缓冲液；(4)连接缓冲液A和B；(5)连接酶Ligase‑65；(6)PCR反应混合液，其包括序列表SEQ ID NO:25～26所示的通用引物；(7)SALSA聚合酶；(8)阴性对照；(9)阳性对照，包含6种猪病毒性腹泻症候群的病原的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。

公开(公告)号：CN108220479B

公开(公告)日：2021-08-13

申请号：CN201810012643.6

申请日：2018-01-05

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 宋厚辉 ,  周莹珊 ,  王晓杜 ,  邵春艳 ,  陈琳 ,  章先 ,  程昌勇 ,  杨杨

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/689 ,  C12Q1/6844 ,  C12Q1/04 ,  C12N15/11 ,  C12R1/145 ,  C12R1/04

Abstract: 本发明涉及生物检测技术，旨在提供一种能检测多种猪猝死症病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒包括：反转录和预扩增引物混合液、探针混合液、MLPA缓冲液、连接缓冲液A、连接缓冲液B、连接酶Ligase‑65、PCR反应混合液、SALSA聚合酶、阴性对照、阳性对照。与现有技术相比，本发明具有高通量、特异性好和灵敏度高的特点。能同时检测6种引起猪猝死的病原，利用全自动核酸分析仪每次可同时检测96个样品。通过探针设计、序列比对和blast分析，确保探针只与目标基因相结合。进行检测时只从对应模板中扩增出相应大小的目的片段，对其他病原并无扩增。通过增加RT‑PCR这一步骤对目标基因进行富集，最低可检出1拷贝的目标基因。

公开(公告)号：CN109706269A

公开(公告)日：2019-05-03

申请号：CN201910109233.8

申请日：2019-02-06

Applicant: 浙江农林大学

Inventor： 周莹珊 ,  邵春艳 ,  宋厚辉 ,  王晓杜 ,  陈琳 ,  姜胜 ,  宋泉江 ,  周彬 ,  杨杨 ,  杨永春 ,  孙静 ,  程昌勇

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12R1/93

Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种能检测多种禽呼吸道病原的多重连接探针扩增鉴别试剂盒。该试剂盒中包括：预扩增引物混合液，含有序列如SEQ ID NO：1～14所示预扩增引物；探针混合液，含有序列如SEQ ID NO：15～28所示的左侧探针和右侧探针；MLPA缓冲液；连接缓冲液A；连接缓冲液B；连接酶Ligase-65；PCR反应混合液，含有序列SEQ ID NO：29和30所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照。本发明所述试剂盒具有高通量特点，能同时检测7种病原，利用全自动核酸分析仪，每次可同时检测96个样品，为病原体的鉴别诊断和应急诊断提供高通量检测技术。另外，还具备特异性好和灵敏度高的优点，通过增加RT-PCR步骤对目标基因进行富集，最低可检出1拷贝的目标基因。