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公开(公告)号：CN120006004A
公开(公告)日：2025-05-16
申请号：CN202510150090.0
申请日：2025-02-11
Applicant: 浙江农林大学 , 浙江领与生物科技有限责任公司
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了一种松材线虫的快速检测试剂盒及其方法和应用，所述检测试剂盒包括预混引物探针的荧光RAA干粉试剂，本发明针对基于RAA快速检测松材线虫的引物探针进行设计筛选，得到了特异性扩增松材线虫ITS基因的引物、探针组，与拟松材线虫无交叉反应；同时，试剂盒包括快速提取松材线虫悬液DNA的裂解液，所述裂解液含有季铵盐、异丙醇和DMSO，显著提高了DNA提取的质量和效率。本发明提供的松材线虫检测试剂盒检测特异性强、灵敏度高，操作简单、便携，在野外条件下，30min内快速实现对松材线虫检测。
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公开(公告)号：CN109207635B
公开(公告)日：2021-10-22
申请号：CN201811091220.4
申请日：2018-09-19
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种检测猪病毒性繁殖障碍症候群病原核酸的MLPA检测试剂盒。该试剂盒中包括：反转录和预扩增混合液：反转录和预扩增引物的序列如SEQ ID NO：1～12所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；多重连接探针混合液：其中探针的序列如SEQ ID NO：13～24所示，通用引物的序列如SEQ ID NO：25～26所示；MLPA缓冲液；连接缓冲液A和B；连接酶Ligase‑65；PCR反应混合液，其包括序列SEQ ID NO：25～26所示的通用引物；SALSA聚合酶；阴性对照；阳性对照，包含六种猪病毒性繁殖障碍症候群的病毒CSFV、PRV、JEV、PRRSV、PCV2、PPV的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。
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公开(公告)号：CN112746131A
公开(公告)日：2021-05-04
申请号：CN202011597069.9
申请日：2020-12-29
Applicant: 浙江农林大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明提供了一种禽偏肺病毒分型的多重荧光定量PCR检测的引物与方法。所述引物是根据禽偏肺病毒A亚型和B亚型的SH基因以及C亚型的P基因设计得到，所述引物包括aMPV‑A/B‑SH‑F、aMPV‑A‑SH‑R、aMPV‑B‑SH‑R、aMPV‑C‑SH‑F、aMPV‑C‑SH‑R，其引物序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5所示。本发明提供的引物及检测方法可以快速准确鉴别检测禽偏肺病毒各基因型，能够检测出aMPV的A、B、C三种亚型，且对这三种亚型的最低检测限为1‑10拷贝/μL，其灵敏度高。
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公开(公告)号：CN110665379A
公开(公告)日：2020-01-10
申请号：CN201910951339.2
申请日：2019-10-08
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明涉及生物制剂处理技术，旨在提供一种针对疫苗抗原的油包水型乳化方法。包括：取含有疫苗抗原的水相和作为油相的乳化佐剂，一并加入无菌离心管中得到混合液；称取与混合液等重的无菌陶瓷珠加入混合液中，封闭离心管；将离心管置于均质仪中，对离心管中的混合物进行震荡处理后获得乳化物；将离心管移至离心机中，对乳化后的混合物进行离心处理；停止离心后，陶瓷珠与乳化物自动分离，上层液体即为均一的油包水乳化物。本发明可有效解决传统乳化方法缺点，较短时间即能达到非常好的乳化效果，可用于疫苗成分免疫接种前的乳化以及各种油包水型制剂的乳化。本发明所述方法简单，迅速，产量可观，具有稳定可靠的显著效果。
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公开(公告)号：CN118452205A
公开(公告)日：2024-08-09
申请号：CN202410487476.6
申请日：2024-04-23
Applicant: 浙江农林大学 , 青岛桥成消毒净化工程有限公司
Abstract: 本发明提供一种复合过氧化物消毒液及其制备方法，包括过氧化氢、过氧甲酸、过氧乙酸和过氧丙酸，工艺包括如下步骤：（1）将甲酸、乙酸、丙酸、过氧化氢和浓硫酸按比例混合，25℃环境下静置得复合过氧化物溶液；（2）取步骤（1）的复合过氧化物溶液进行稀释，加入分散剂、稳定剂搅拌，再加入过氧化氢溶液和水，常温下搅拌均匀。本发明制备的复合过氧化物消毒液具有杀菌效果好，杀菌谱广，稳定性高，耐储存，消毒作用时间延长，分解物质无害的有益效果。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114250244A
公开(公告)日：2022-03-29
申请号：CN202111529548.1
申请日：2021-12-14
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明提供一种以重组减毒单増李斯特菌为载体的结肠癌疫苗及制备方法，涉及基因工程领域，是以减毒单増李斯特菌背景菌株Lemo‑C07为背景载体，利用PCR技术扩增Lemo‑C07的hly基因498bp以及hly基因下游500bp分别作为片段A和片段B；利用SOE‑PCR技术将三个片段(抗原片段AH1设计在引物上)连在一起获得A‑B的目的片段，如序列SEQ ID NO.1所示；以KpnⅠ和PstⅠ为酶切位点，经酶切、酶连至李斯特菌穿梭质粒pKSV7，获得重组质粒pSL1885，并经质粒电转、同源重组和质粒丢失，获得重组减毒单増李斯特菌载体疫苗。将肿瘤特异性抗原基因整合至减毒李斯特菌基因组中，使抗原基因能够稳定表达，不易丢失；使用的减毒株Lemo‑C07与野生株相比，毒力降低了近10000倍；不含抗性质粒，无抗生素耐药风险，安全性更高。
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公开(公告)号：CN114181881A
公开(公告)日：2022-03-15
申请号：CN202111534663.8
申请日：2021-12-15
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，旨在提供一种基于氨基酸改造的新型减毒单增李斯特菌构建方法及应用。该减毒单核细胞增多性李斯特菌是以单増李斯特菌野生株为背景，经敲除hly基因中第251‑255位氨基酸后获得。本发明提供了含有该减毒单核细胞增多性李斯特菌的减毒菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明的单増李斯特菌的减毒株可作为外源抗原递送活载体用于肿瘤等疾病的免疫治疗或免疫佐剂。由于是在李斯特菌基因组上进行敲除修饰，不含抗性质粒等生物标记，符合生物安全，且不影响李斯特菌体外生长。
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公开(公告)号：CN111269868A
公开(公告)日：2020-06-12
申请号：CN202010077820.6
申请日：2020-02-01
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明涉及基因工程领域，旨在提供一种减毒单核细胞增多性李斯特菌的构建方法和用途。是以单増李斯特菌野生株EGD-e菌株为构建亲本，将hly基因的第478位天冬酰胺和第479位缬氨酸分别突变为丙氨酸，且不含质粒；最终所得减毒株命名为Lemo-C07，其保藏编号为：CGMCC 18647，保藏机构为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。本发明的单増李斯特菌的减毒株可用于活疫苗治疗载体或免疫佐剂；通过氨基酸定点突变单增李斯特菌毒力基因hly的关键位点N478和V479后使该细菌毒力大大降低(达到安全级别)，但仍保留了非常好的免疫原性。由于是在李斯特菌基因组上进行直接突变，菌内不含抗性质粒，符合生物安全，并且不会由于质粒的丢失而影响李斯特菌的生长。
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公开(公告)号：CN109097499A
公开(公告)日：2018-12-28
申请号：CN201811091219.1
申请日：2018-09-19
Applicant: 浙江农林大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12R1/93
Abstract: 本发明涉及检验检疫领域，旨在提供一种用于检测PEDV-TGEV核酸的双重荧光定量RT-PCR检测试剂盒。(1)反转录和荧光定量RT-PCR扩增混合液：该混合液包含反转录和荧光定量扩增引物以及探针，其序列如SEQ ID NO：1～6所示；其中，反转录引物为12碱基随机引物；(2)阴性对照；(3)阳性对照，包含猪流行性腹泻病毒和猪传染性胃肠炎病毒的阳性对照质粒。与现有方法比较，本发明具有高通量、节省费用、特异性好、灵敏度高的优点。
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公开(公告)号：CN119639813A
公开(公告)日：2025-03-18
申请号：CN202411707334.2
申请日：2024-11-27
Applicant: 浙江农林大学
Abstract: 本发明涉及生物技术领域。本发明提供了表达人乳头瘤病毒16和18型E7细胞模型构建方法，其包括如下步骤：在接种有TC‑1细胞的培养基中，将外源质粒转染入TC‑1细胞中；所述培养基中含有G418遗传霉素；所述外源质粒可以稳转HPV18E7。本发明成功构建TC‑1‑HPV18E7细胞模型和小鼠模型，证实重组菌株疫苗LM‑HPV18E7在小鼠模型应用试验中表现出良好的治疗效果。TC‑1‑HPV18E7细胞模型将会使以TC‑1为基础的细胞模型用途将得到扩展，为后续二价甚至多价治疗性疫苗的研发奠定基础。
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