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公开(公告)号：CN116103340A
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202211433138.1
申请日：2022-11-16
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明利用一种基于CRISPR‑Cas9编辑技术得到敲除人Twist1基因的细胞系，其原理和最核心的关键技术是科学合理的构建了靶向人Twist1基因的sgRNA，然后将sgRNA克隆至带有Cas9基因的lentiCRISPR v2质粒并将质粒转染至细胞中，利用CRISPR‑Cas9系统达到基因沉默，通过药物筛选和亚克隆的方法最后获得阳性单克隆细胞株，从而获得人源Twist1敲除的293T细胞系。在SeV感染后促进了IFN‑β的产生，用于宿主抗病毒的天然免疫相关疾病等研究，也为研发抗病毒靶点药物提供了新思路。填补了国内外相关技术的空白，具有较大的应用研究价值，社会和经济效益巨大。
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公开(公告)号：CN113088497A
公开(公告)日：2021-07-09
申请号：CN202110433097.5
申请日：2021-04-22
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明涉及一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法，设计靶向abhd16a基因在第三个外显子的sgRNA序列，并构建pHMG‑sgRNA‑sgabhd16a敲除表达载体；将含有靶向abhd16a基因的sgRNA表达载体通过脂质体转染至HEK293细胞，通过CTAB法提取细胞基因组扩增含有靶向sgRNA序列上下游片段，测序检测是否有基因编辑；通过嘌呤霉素筛选后，利用有限稀释法获得除abhd16a基因敲除细胞细胞株，通过免疫印迹法检测敲除细胞株中abhd16a基因敲除后蛋白表达水平。本发明通过CRISPR/Cas9构建HEK293‑ABHD16A‑/‑细胞系，为进一步研究ABHD16A功能和作用机制提供有效的工具。
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公开(公告)号：CN113025579A
公开(公告)日：2021-06-25
申请号：CN202110433108.X
申请日：2021-04-22
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12N5/10 , C12N15/113 , C12N15/867 , C12N7/01 , C12R1/91
Abstract: 本发明涉及一种稳定敲低猪abhd16a基因的ST‑KDABHD16A细胞系及其构建方法，通过在线设计网站设计猪abhd16a基因的shRNA序列，构建至慢病毒载体PLKO.1‑puro，与双质粒系统逆病毒包装质粒pCMV‑Gag‑Pol、pCVM‑VSV‑G慢病毒通过人HEK293T/17细胞组装获得慢病毒；经过纯化和浓缩后的慢病毒感染ST细胞，通过嘌呤霉素筛选获得稳定敲低abhd16a的ST‑KDABHD16A细胞株。并通过实时荧光定量PCR检测细胞株中abhd16a mRNA表达水平，通过免疫印迹法检测敲减细胞株中ABHD16A蛋白水平的表达。本发明以猪易感细胞系ST细胞为模型，利用慢病毒为工具，构建出稳定敲低猪的abhd16a细胞系ST‑KDABHD16A，为研究猪abhd16a在抵御病毒入侵机制及免疫过程中发挥的作用，以及为感染乙型脑炎病毒后引起的繁殖障碍研究提供新的实验材料。
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公开(公告)号：CN102174647B
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201010606982.0
申请日：2010-12-27
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种南方型玉米锈病病原真菌的特异引物及分子检测方法。该特异引物包括：上游引物：5’-CTCCAAGAACTTCCTCCTC-3'，下游引物：5’-TGACATGAAGTAGAAATTCT-3'；采用上述引物，经PCR扩增（扩增参数95℃预变性5min；然后94℃变性45sec，55℃退火45sec72℃延伸90sec，共30个循环；72℃延伸10min）、琼脂糖凝胶电泳，通过扩增产物（片段长度约540bp）检测田间玉米的带菌情况。本发明所用引物对玉米条锈菌具有很强的特异性；可用于玉米锈病的检测，其灵敏度可达0.001ng/μL；本发明检测方法实用性好，操作简便快速。
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公开(公告)号：CN102600466A
公开(公告)日：2012-07-25
申请号：CN201210078706.0
申请日：2012-03-23
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种抗甲型流感病毒新型通用表位疫苗的制备方法，采用生物信息学方法，结合网络服务器和相关软件对流感保护抗原相关的NP、M1和HA功能表位进行了预测，获得来自H1N1、H3N1、H3N2、H5N1、H5N2亚型CTL表位和B细胞表位共8条表位，在每两个表位之间加入柔性片段GPGPG连接，命名为HMN；将表位多肽相应的核苷酸序列连到质粒载体上，原核系统表达，纯化的表达蛋白配以佐剂制成疫苗，免疫小鼠。该重组多肽，通过western blot试验，证明目的基因有效表达且具有抗原性；通过小鼠免疫试验，试验组T淋巴细胞亚群指数高于对照组，表明该多肽可诱导BALC/c小鼠产生针对所选表位的特殊性体液免疫和细胞免疫反应，证明其具有较强免疫原性。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN102174647A
公开(公告)日：2011-09-07
申请号：CN201010606982.0
申请日：2010-12-27
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种南方型玉米锈病病原真菌的特异引物及分子检测方法。该特异引物包括：上游引物：5’-CTCCAAGAACTTCCTCCTC-3'，下游引物：5’-TGACATGAAGTAGAAATTCT-3'；采用上述引物，经PCR扩增（扩增参数95℃预变性5min；然后94℃变性45sec，55℃退火45sec72℃延伸90sec，共30个循环；72℃延伸10min）、琼脂糖凝胶电泳，通过扩增产物（片段长度约540bp）检测田间玉米的带菌情况。本发明所用引物对玉米条锈菌具有很强的特异性；可用于玉米锈病的检测，其灵敏度可达0.001ng/μL；本发明检测方法实用性好，操作简便快速。
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公开(公告)号：CN102146439A
公开(公告)日：2011-08-10
申请号：CN201010606639.6
申请日：2010-12-27
Applicant: 河南农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明涉及一种普通型玉米锈病病原真菌的特异引物及分子检测方法。该特异引物包括：上游引物：5’-TTTAGTAGTCTCTATCTCAACAACA-3'，下游引物：5’-AAGACTCTTTTGCATGGTTT-3'；采用上述引物，经PCR扩增（扩增参数95℃预变性5min；然后94℃变性45sec，55℃退火45sec，72℃延伸90sec，共30个循环；72℃延伸10min）、琼脂糖凝胶电泳，通过扩增产物（片段长度约480bp）检测田间玉米的带菌情况。本发明所用引物对玉米条锈菌具有很强的特异性；可用于玉米锈病的检测，其灵敏度可达0.001ng/μL；本发明检测方法实用性好，操作简便快速。
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公开(公告)号：CN102600466B
公开(公告)日：2014-06-11
申请号：CN201210078706.0
申请日：2012-03-23
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明公开了一种抗甲型流感病毒新型通用表位疫苗的制备方法，采用生物信息学方法，结合网络服务器和相关软件对流感保护抗原相关的NP、M1和HA功能表位进行了预测，获得来自H1N1、H3N1、H3N2、H5N1、H5N2亚型CTL表位和B细胞表位共8条表位，在每两个表位之间加入柔性片段GPGPG连接，命名为HMN；将表位多肽相应的核苷酸序列连到质粒载体上，原核系统表达，纯化的表达蛋白配以佐剂制成疫苗，免疫小鼠。该重组多肽，通过western？blot试验，证明目的基因有效表达且具有抗原性；通过小鼠免疫试验，试验组T淋巴细胞亚群指数高于对照组，表明该多肽可诱导BALC/c小鼠产生针对所选表位的特殊性体液免疫和细胞免疫反应，证明其具有较强免疫原性。
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公开(公告)号：CN119971847A
公开(公告)日：2025-05-13
申请号：CN202510158957.7
申请日：2025-02-13
Applicant: 河南农业大学
IPC: B01F31/40 , B01F35/42 , B01F101/23 , B01F101/44
Abstract: 本发明公开了一种细胞实验的混合设备及其使用方法，涉及细胞混合的技术领域，其包括，支撑单元，包括底座、底环套、浮动环套和中心支柱，所述中心支柱固定设置在底座中部，所述底环套固定连接在底座顶部，所述浮动环套活动连接在中心支柱上；混合单元，包括浮动卡件、回弹帽和混合杆，所述浮动卡件活动设置在中心支柱内，并与所述浮动环套固定，所述回弹帽活动设置在中心支柱顶部，所述混合杆设置有若干组，并呈周向固定在回弹帽外。本发明解决了现有混合装置存在的混合不均匀，并且无法适配不同长短的试管的问题。
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公开(公告)号：CN119464379A
公开(公告)日：2025-02-18
申请号：CN202411644194.9
申请日：2024-11-18
Applicant: 河南农业大学
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种猪ATP6v0d2(sATP6v0d2)敲除PK15细胞系的构建方法及其在抑制乙型脑炎病毒感染中的应用。本发明提供了特异性靶向sATP6v0d2的sgRNA，结合CRI SPR/Cas9基因编辑技术在猪肾PK15细胞中实现了sATP6v0d2基因的敲除，获得的单克隆细胞能够显著抑制乙型脑炎病毒的感染，对乙型脑炎疾病的防治具有重要意义。本方法简便高效，构建的细胞系可广泛应用于ATP6v0d2基因功能以及乙型脑炎病毒感染相关的研究，具有广阔的应用前景。
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