公开(公告)号：CN113088497A

公开(公告)日：2021-07-09

申请号：CN202110433097.5

申请日：2021-04-22

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 许君 ,  徐朝 ,  李小玲 ,  邢国珍 ,  薛继初 ,  郑文明

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种稳定敲除abhd16a基因的HEK293细胞系及其构建方法，设计靶向abhd16a基因在第三个外显子的sgRNA序列，并构建pHMG‑sgRNA‑sgabhd16a敲除表达载体；将含有靶向abhd16a基因的sgRNA表达载体通过脂质体转染至HEK293细胞，通过CTAB法提取细胞基因组扩增含有靶向sgRNA序列上下游片段，测序检测是否有基因编辑；通过嘌呤霉素筛选后，利用有限稀释法获得除abhd16a基因敲除细胞细胞株，通过免疫印迹法检测敲除细胞株中abhd16a基因敲除后蛋白表达水平。本发明通过CRISPR/Cas9构建HEK293‑ABHD16A‑/‑细胞系，为进一步研究ABHD16A功能和作用机制提供有效的工具。