公开(公告)号：CN113025579A

公开(公告)日：2021-06-25

申请号：CN202110433108.X

申请日：2021-04-22

Applicant: 河南农业大学

Inventor： 许君 ,  徐朝 ,  邢国珍 ,  顾伟桢 ,  李小玲 ,  郑文明

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/113 ,  C12N15/867 ,  C12N7/01 ,  C12R1/91

Abstract: 本发明涉及一种稳定敲低猪abhd16a基因的ST‑KDABHD16A细胞系及其构建方法，通过在线设计网站设计猪abhd16a基因的shRNA序列，构建至慢病毒载体PLKO.1‑puro，与双质粒系统逆病毒包装质粒pCMV‑Gag‑Pol、pCVM‑VSV‑G慢病毒通过人HEK293T/17细胞组装获得慢病毒；经过纯化和浓缩后的慢病毒感染ST细胞，通过嘌呤霉素筛选获得稳定敲低abhd16a的ST‑KDABHD16A细胞株。并通过实时荧光定量PCR检测细胞株中abhd16a mRNA表达水平，通过免疫印迹法检测敲减细胞株中ABHD16A蛋白水平的表达。本发明以猪易感细胞系ST细胞为模型，利用慢病毒为工具，构建出稳定敲低猪的abhd16a细胞系ST‑KDABHD16A，为研究猪abhd16a在抵御病毒入侵机制及免疫过程中发挥的作用，以及为感染乙型脑炎病毒后引起的繁殖障碍研究提供新的实验材料。