基于RT-RPA和CRISPR/Cas的DHAV-1和DHAV-3检测体系及应用

    公开(公告)号:CN112538550B

    公开(公告)日:2023-05-09

    申请号:CN202011570889.9

    申请日:2020-12-26

    Abstract: 本发明公开了基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系及应用,基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系包括RT‑RPA体系和CRISPR/Cas体系,RT‑RPA体系包括DHAV‑1的RT‑RPA扩增引物RPA‑F1/RPA‑R1和DHAV‑3的RT‑RPA扩增引物RPA‑F3/RPA‑R3,CRISPR/Cas体系同时包括CRISPR//Cas12a和CRISPR//Cas13a两种蛋白,Cas12a为LbCas12a,Cas13a为LwCas13a。本发明基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系能够快速、精准检测DHAV‑1和DHAV‑3,而且可检测出含单拷贝DHAV‑1和DHAV‑3的样品,灵敏度高,而且可一次性全面检测DHAV‑1和DHAV‑3,并且区分是血清1型或是血清3型感染或是共感染,检测体系可在恒温37℃进行反应,对设备要求低,将上述DHAV‑1和DHAV‑3检测体系制作为试剂盒适用于推广使用。

    用于滑液支原体鉴定的特有功能基因、核酸染料qPCR引物、试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN112501329A

    公开(公告)日:2021-03-16

    申请号:CN202011570899.2

    申请日:2020-12-26

    Abstract: 本发明公开了用于滑液支原体鉴定的特有功能基因、核酸染料qPCR引物、试剂盒及其应用,基于核酸染料qPCR鉴定滑液支原体的引物为正向引物VY2250F、反向引物VY2250R组成的引物对和/或正向引物VY2300F、反向引物VY2300R组成的引物对,通过核酸染料qPCR检测滑液支原体的特有功能基因VY93_RS02250基因和/或VY93_RS02300基因以鉴定滑液支原体,当检测样品检测不到CT值时,则判定滑液支原体核酸阴性;当检测样品的CT值≤35,出现典型的S型扩增曲线,判定滑液支原体核酸阳性;当检测样品的CT值>35,或虽然CT值≤35但扩增曲线不显著,则建议对样品进行复检。本发明鉴定方法简单,引物检测准确度高、特异性高、敏感性高、重复性强,且成本低,对滑液支原体的临床确诊和推广应用具有重要意义。

    用于滑液支原体鉴定的特有功能基因、核酸染料qPCR引物、试剂盒及其应用

    公开(公告)号:CN112501329B

    公开(公告)日:2023-04-11

    申请号:CN202011570899.2

    申请日:2020-12-26

    Abstract: 本发明公开了用于滑液支原体鉴定的特有功能基因、核酸染料qPCR引物、试剂盒及其应用,基于核酸染料qPCR鉴定滑液支原体的引物为正向引物VY2250F、反向引物VY2250R组成的引物对和/或正向引物VY2300F、反向引物VY2300R组成的引物对,通过核酸染料qPCR检测滑液支原体的特有功能基因VY93_RS02250基因和/或VY93_RS02300基因以鉴定滑液支原体,当检测样品检测不到CT值时,则判定滑液支原体核酸阴性;当检测样品的CT值≤35,出现典型的S型扩增曲线,判定滑液支原体核酸阳性;当检测样品的CT值>35,或虽然CT值≤35但扩增曲线不显著,则建议对样品进行复检。本发明鉴定方法简单,引物检测准确度高、特异性高、敏感性高、重复性强,且成本低,对滑液支原体的临床确诊和推广应用具有重要意义。

    基于RT-RPA和CRISPR/Cas的DHAV-1和DHAV-3检测体系及应用

    公开(公告)号:CN112538550A

    公开(公告)日:2021-03-23

    申请号:CN202011570889.9

    申请日:2020-12-26

    Abstract: 本发明公开了基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系及应用,基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系包括RT‑RPA体系和CRISPR/Cas体系,RT‑RPA体系包括DHAV‑1的RT‑RPA扩增引物RPA‑F1/RPA‑R1和DHAV‑3的RT‑RPA扩增引物RPA‑F3/RPA‑R3,CRISPR/Cas体系同时包括CRISPR//Cas12a和CRISPR//Cas13a两种蛋白,Cas12a为LbCas12a,Cas13a为LwCas13a。本发明基于RT‑RPA和CRISPR/Cas的DHAV‑1和DHAV‑3检测体系能够快速、精准检测DHAV‑1和DHAV‑3,而且可检测出含单拷贝DHAV‑1和DHAV‑3的样品,灵敏度高,而且可一次性全面检测DHAV‑1和DHAV‑3,并且区分是血清1型或是血清3型感染或是共感染,检测体系可在恒温37℃进行反应,对设备要求低,将上述DHAV‑1和DHAV‑3检测体系制作为试剂盒适用于推广使用。

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