公开(公告)号：CN119040291A

公开(公告)日：2024-11-29

申请号：CN202310617222.7

申请日：2023-05-29

Applicant: 江南大学

Inventor： 王宁 ,  高晓冬 ,  项梦海

IPC: C12N9/10 ,  C12P21/00 ,  C12N15/866 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明公开了一种人源复合型N‑糖肽的体外组装方法，包括在昆虫细胞中表达布氏锥虫来源的寡糖基转移酶TbSTT3A；利用寡糖基转移酶TbSTT3A催化，将含N‑糖链的脂肪醇寡糖中的寡糖转移到人源多肽上，得到人源复合型N‑糖肽；其中，所述寡糖基转移酶TbSTT3A基因具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。本发明利用底物适配性高的TbSTT3A首次将复合型N‑糖链直接转移到人源多肽链上，实现了特定结构糖链修饰的人源N‑糖肽/糖蛋白的高效组装，对于全面解析人源N‑糖链结构的生物活性以及开发糖蛋白类药物的生产技术具有重要意义。

公开(公告)号：CN111534495A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010406876.1

申请日：2020-05-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  项梦海 ,  王宁 ,  陆天天

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种提高重组N-乙酰葡糖胺转移酶II可溶性表达的方法，其中，一种提高重组N-乙酰葡糖胺转移酶II在大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其包括，构建截短型N-乙酰葡糖胺转移酶II，得GnT-II-ΔTM，序列如SEQ ID NO:1所示；构建重组表达质粒；将所述重组表达质粒转化表达宿主菌，构建重组原核表达菌株；培养所述重组原核表达菌株，诱导表达。本发明在大肠杆菌中成功表达并提高重组人源GnT-II的可溶性表达量，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT-II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备重组GnT-II。

公开(公告)号：CN114958943A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210575512.5

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 王宁 ,  高晓冬 ,  项梦海 ,  陆天天

IPC: C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12P19/28 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C07K1/14 ,  C07K1/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种植烷醇连接的复合型寡糖的合成方法，包括，分别在大肠杆菌中表达并纯化酵母来源的糖基转移酶Alg1以及人源的糖基转移酶Alg2、糖基转移酶GnT‑I、糖基转移酶GnT‑II和糖基转移酶GalT以及幽门螺旋杆菌来源的糖基转移酶FuT，以PPGn2与GDP‑Man作为初始底物，在体外成功制备了典型复合型寡糖PPGn2‑Man3Gn2、PPGn2‑Man3Gn2Gal2以及其他非典型N‑寡糖。本发明解决了膜蛋白在原核表达体系极易降解和纯化困难的问题，并克服了有机合成的困难，利用化学酶法催化得到多种具有生物活性的寡糖结构，推动糖化学和糖生物学的发展。

公开(公告)号：CN111534495B

公开(公告)日：2022-06-17

申请号：CN202010406876.1

申请日：2020-05-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  项梦海 ,  王宁 ,  陆天天

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种提高重组N‑乙酰葡糖胺转移酶II可溶性表达的方法，其中，一种提高重组N‑乙酰葡糖胺转移酶II在大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其包括，构建截短型N‑乙酰葡糖胺转移酶II，得GnT‑II‑ΔTM，序列如SEQ ID NO:1所示；构建重组表达质粒；将所述重组表达质粒转化表达宿主菌，构建重组原核表达菌株；培养所述重组原核表达菌株，诱导表达。本发明在大肠杆菌中成功表达并提高重组人源GnT‑II的可溶性表达量，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT‑II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备重组GnT‑II。