公开(公告)号：CN111334485B

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN201811566703.5

申请日：2018-12-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  陆天天 ,  王宁

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了一种人源N‑乙酰葡糖胺转移酶II原核表达方法及其产品，涉及在大肠杆菌中表达人源的GnT‑IIΔTM、GnT‑IIΔTM的纯化、GnT‑IIΔTM的体外活性检测等方面。本发明在大肠杆菌中成功表达并纯化了人源的GnT‑IIΔTM，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT‑II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备GnT‑IIΔTM。获得具有体外活性的重组人源GnT‑II解决了重要寡糖结构Gn2Man3Gn2的酶法合成问题，推动糖化学与糖生物学的发展。

公开(公告)号：CN114958943A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210575512.5

申请日：2022-05-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 王宁 ,  高晓冬 ,  项梦海 ,  陆天天

IPC: C12P19/18 ,  C12P19/00 ,  C12P19/28 ,  C12N15/70 ,  C12N15/54 ,  C12N9/10 ,  C07K1/14 ,  C07K1/22 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种植烷醇连接的复合型寡糖的合成方法，包括，分别在大肠杆菌中表达并纯化酵母来源的糖基转移酶Alg1以及人源的糖基转移酶Alg2、糖基转移酶GnT‑I、糖基转移酶GnT‑II和糖基转移酶GalT以及幽门螺旋杆菌来源的糖基转移酶FuT，以PPGn2与GDP‑Man作为初始底物，在体外成功制备了典型复合型寡糖PPGn2‑Man3Gn2、PPGn2‑Man3Gn2Gal2以及其他非典型N‑寡糖。本发明解决了膜蛋白在原核表达体系极易降解和纯化困难的问题，并克服了有机合成的困难，利用化学酶法催化得到多种具有生物活性的寡糖结构，推动糖化学和糖生物学的发展。

公开(公告)号：CN111534495B

公开(公告)日：2022-06-17

申请号：CN202010406876.1

申请日：2020-05-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  项梦海 ,  王宁 ,  陆天天

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种提高重组N‑乙酰葡糖胺转移酶II可溶性表达的方法，其中，一种提高重组N‑乙酰葡糖胺转移酶II在大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其包括，构建截短型N‑乙酰葡糖胺转移酶II，得GnT‑II‑ΔTM，序列如SEQ ID NO:1所示；构建重组表达质粒；将所述重组表达质粒转化表达宿主菌，构建重组原核表达菌株；培养所述重组原核表达菌株，诱导表达。本发明在大肠杆菌中成功表达并提高重组人源GnT‑II的可溶性表达量，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT‑II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备重组GnT‑II。

公开(公告)号：CN111534495A

公开(公告)日：2020-08-14

申请号：CN202010406876.1

申请日：2020-05-14

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  项梦海 ,  王宁 ,  陆天天

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明公开了一种提高重组N-乙酰葡糖胺转移酶II可溶性表达的方法，其中，一种提高重组N-乙酰葡糖胺转移酶II在大肠杆菌中可溶性表达量的方法，其包括，构建截短型N-乙酰葡糖胺转移酶II，得GnT-II-ΔTM，序列如SEQ ID NO:1所示；构建重组表达质粒；将所述重组表达质粒转化表达宿主菌，构建重组原核表达菌株；培养所述重组原核表达菌株，诱导表达。本发明在大肠杆菌中成功表达并提高重组人源GnT-II的可溶性表达量，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT-II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备重组GnT-II。

公开(公告)号：CN110317799A

公开(公告)日：2019-10-11

申请号：CN201910650553.4

申请日：2019-07-18

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  陆天天 ,  王宁

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明公开了一种岩藻糖转移酶8的原核表达方法及其产品，其中一种岩藻糖转移酶8的原核表达方法，其包括，构建截短型岩藻糖转移酶8，得Fut8ΔTM；构建重组表达质粒；将所述重组表达质粒转化表达宿主菌，表达、纯化；其中，所述Fut8ΔTM的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；一种原核表达的岩藻糖转移酶8，其包括岩藻糖转移酶8核心区氨基酸序列，所述藻糖转移酶8核心区氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明利用大肠杆菌成功表达人源截短型Fut8(Fut8ΔTM)，可以在短时间内大量制备该蛋白并且保持其较高的生物活性，有表达效率高、杂蛋白少、易于纯化、廉价方便等特点。

公开(公告)号：CN111334485A

公开(公告)日：2020-06-26

申请号：CN201811566703.5

申请日：2018-12-19

Applicant: 江南大学

Inventor： 高晓冬 ,  陆天天 ,  王宁

IPC: C12N9/10 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明提供了一种人源N-乙酰葡糖胺转移酶II原核表达方法及其产品，涉及在大肠杆菌中表达人源的GnT-IIΔTM、GnT-IIΔTM的纯化、GnT-IIΔTM的体外活性检测等方面。本发明在大肠杆菌中成功表达并纯化了人源的GnT-IIΔTM，且该酶在体外具有催化活性，解决了哺乳动物膜蛋白GnT-II原核表达极易降解、纯化困难的技术问题，可以大量制备GnT-IIΔTM。获得具有体外活性的重组人源GnT-II解决了重要寡糖结构Gn2Man3Gn2的酶法合成问题，推动糖化学与糖生物学的发展。