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公开(公告)号：CN106119220B
公开(公告)日：2019-07-23
申请号：CN201610534520.X
申请日：2016-07-07
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化活性和对映归一性提高的菜豆环氧化物水解酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达领域。本发明在具有一定对映归一性催化特性的环氧化物水解酶基础上，通过定点突变生物技术改造环氧化物水解酶分子结构，得到一株催化活性和对映归一性均提高的环氧化物水解酶突变体PvEH1L105I/M160A/M175I。突变体具有高对映归一择性、高催化活性的优点，有较大应用潜力，也为EH的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN109880876A
公开(公告)日：2019-06-14
申请号：CN201811620616.3
申请日：2018-12-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种利用菜豆环氧化物水解酶制备(R)-间硝基苯乙二醇的方法，属于生物催化技术领域。本发明以表达有环氧化物水解酶PvEH2的大肠杆菌全细胞为催化剂，根据其针对外消旋间硝基环氧苯乙烷的优良的立体选择性特性，通过建立一种双相体系——石油醚/水，提高了底物的初始上样浓度和整个催化反应的效率，减轻了单水相体系中高浓度的间硝基环氧苯乙烷对于PvEH2活性的抑制，同时降低了底物自发水解的程度，产物邻二醇的对映体纯度(eep)可达90.2％，底物的转化率可达99.5％。
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公开(公告)号：CN104531630B
公开(公告)日：2017-07-14
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104531728A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410755394.1
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明提出了一种源自宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)E001的一种环氧化物水解酶cDNA基因序列的克隆方法，其核苷酸序列为SEQ ID NO:1，命名为Aueh1，其氨基酸序列为SEQ ID NO:2，该酶命名为AuEH1。本发明还公开了AuEH1工程菌的构建以及重组AuEH1的异源表达和活性测定的方法。以20mM消旋体环氧苯乙烷为底物，重组AuEH1工程菌全细胞催化，获得(S)-SO的对映体过量率ee>94％。AuEH1具有较高的催化活性和手性选择性，有较大的工业化生产和应用潜力及经济价值。
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公开(公告)号：CN104531630A
公开(公告)日：2015-04-22
申请号：CN201410752769.9
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
CPC分类号： C12N9/14 , C12Y303/02003
摘要： 本发明提出了一种高对映体选择性的AuEH2G218S和AuEH2S247Y突变酶的设计与构建，通过序列同源性分析、同源建模、分子对接和动力学模拟等最终确定突变位点，利用大引物PCR技术获得突变基因命名为Aueh2G218S和Aueh2S247Y。本发明还公开了突变酶工程菌的构建以及高效表达的方法，制备的突变酶具有高高对映体选择性及催化活性的特性，具有较大的工业化生产潜力。
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公开(公告)号：CN104404066A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410758070.3
申请日：2014-12-10
申请人： 江南大学
摘要： 本发明的目的是提供一种天然二硫键与阿魏酸酯酶A功能相关性的验证方法，以及突变阿魏酸酯酶A工程菌构建、突变酶异源表达的方法。根据来源于A.usamii E001阿魏酸酯酶A(AuFaeA)的模拟空间结构设计单突变C29T、C91T和C234T，得到突变阿魏酸酯酶A：AuFaeAC29T、AuFaeAC91T和AuFaeAC234T，其成熟肽基因序列为SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:5。突变后该酶的酶活性和最适温度都有大幅下降，证明了二硫键是影响阿魏酸酯酶A功能发挥的关键因素，为其它与AuFaeA一级结构相似的A类阿魏酸酯酶的耐热性改造奠定了基础。
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公开(公告)号：CN111471662B
公开(公告)日：2022-03-25
申请号：CN202010288719.5
申请日：2020-04-14
申请人： 江南大学
摘要： 本发明涉及SlEH1突变体及其在对映归一水解环氧化物中的应用，属于酶工程与生物催化领域。本发明通过番茄来源的环氧水解酶(SlEH1)的106和189位进行组合点突变，获得对映归一性提高的突变体。突变体SlEH1W106T/F189L归一性合成(R)‑1,2‑辛二醇的eep值提高至95.4％，相比于野生型酶提高了44.1％；并且SlEH1W106T/F189L可单次归一性合成400mmol/L(R)‑1,2‑辛二醇，最终得到(R)‑1,2‑辛二醇的eep>99.0％，总产率为82.6％，是目前报道的最佳催化剂。并且四种突变体对另外五种脂肪类环氧化物的归一性也有明显提高。
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公开(公告)号：CN109355272B
公开(公告)日：2020-12-29
申请号：CN201811621705.X
申请日：2018-12-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种催化效率提高的木聚糖酶突变体，属于基因工程和蛋白质表达技术领域。本发明通过定点突变和饱和突变生物技术改造木聚糖酶的分子结构，得到一株催化活性提高的木聚糖酶突变体AEx11AT98D/V124Q。突变酶的比活性及催化效率分别为AEx11A的3.04和2.74倍，而且该酶在耐高温和高热稳定性方面仍然和原酶类似。本发明解决了木聚糖酶催化活性低的限制性问题，有较大应用潜力，也为木聚糖酶的研究奠定了理论基础。
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公开(公告)号：CN109355271B
公开(公告)日：2020-09-04
申请号：CN201811621721.9
申请日：2018-12-28
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开了一种海洋红酵母来源的环氧化物水解酶及其应用，属于生物技术领域。本发明提供了一种来源于海洋红酵母R.paludigenum的环氧化物水解酶基因(rpeh1)及对应的氨基酸序列；构建了含有该基因的重组质粒pET28a(+)‑rpeh1和基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28a(+)‑rpeh1，并利用该菌株制备重组环氧化物水解酶；应用本发明构建的基因工程菌进行生物催化，制备得到对映纯的R型苯基乙二醇ee>73％。
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公开(公告)号：CN107988308B
公开(公告)日：2020-05-08
申请号：CN201810033872.6
申请日：2018-01-15
申请人： 江南大学
摘要： 本发明公开一种立体选择性提高的菜豆环氧水解酶突变体及其应用，属于酶工程技术领域。本发明通过菜豆来源的环氧水解酶进行单向定点突变，获得对映选择性与对映归一性提高的突变酶W102L。与野生型相比，W102L对外消旋对氯环氧苯乙烷rac‑pCSO的E值从2.6提高至25.5，对rac‑pCSO的对映选择性提高了9.8倍。使用PvEH1W102L全细胞动力学拆分150mmol·L‑1的rac‑pCSO，反应4h后，可获得(R)‑对氯环氧苯乙烷的产率为45.62％(ees＝96.30％)和(R)‑对氯苯基乙二醇产率为50.91％(eep＝90.26％)。
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