公开(公告)号：CN117043344A

公开(公告)日：2023-11-10

申请号：CN202280022277.7

申请日：2022-03-17

Applicant: 株式会社钟化

Inventor： 西辉之 ,  前田博文 ,  北野光昭

IPC: C12N15/63

Abstract: 本发明提供具有编码前端粒酶的核酸序列、上述前端粒酶所识别的一对核酸序列、位于上述一对核酸序列之间且编码目标蛋白的核酸序列的载体、使用了该载体的直链状共价闭合DNA的制备方法、细小病毒载体的制备方法、以及细小病毒载体产生细胞，所述细小病毒载体的制备方法包括：将具有编码前端粒酶的核酸序列、上述前端粒酶所识别的一对核酸序列、位于上述一对核酸序列之间且编码蛋白质的核酸序列的载体导入第1宿主的基因导入工序、以及将通过上述基因导入工序得到的直链状共价闭合DNA转染至第2宿主的转染工序，所述细小病毒载体产生细胞是通过直链状共价闭合DNA得到的表达编码蛋白质的核酸序列的细小病毒载体，通过定量PCR法定量时的上述编码蛋白质的核酸序列以外的序列的载体基因组数相对于上述编码蛋白质的核酸序列的载体基因组数在上述细小病毒载体产生细胞的培养上清中为10％以下，或者在上述细小病毒载体产生细胞的细胞溶解液中为1％以下。

公开(公告)号：CN119790157A

公开(公告)日：2025-04-08

申请号：CN202380065085.9

申请日：2023-09-12

Applicant: 株式会社钟化

Inventor： 重田美津纪 ,  大岛勘二 ,  西辉之 ,  前田博文 ,  水口和信

IPC: C12N15/63 ,  C07K19/00 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12N9/12 ,  C12N9/16 ,  C12N15/10 ,  C12N15/11 ,  C12N15/54 ,  C12N15/55 ,  C12N15/62

Abstract: 本发明的课题在于提供用于简便且高效地制备直链状共价闭合DNA的新方法。本发明提供一种双链环状DNA载体，其包含：编码前端粒酶或其活性片段的前端粒酶基因序列、编码核酸内切酶或其活性片段的核酸内切酶基因序列、用于上述前端粒酶或其活性片段识别并将上述载体切断的一对前端粒酶识别序列、用于识别上述核酸内切酶或其活性片段并将上述载体切断的至少1个核酸内切酶识别序列、以及目标核酸序列，在上述双链环状DNA载体中，上述前端粒酶基因序列、上述核酸内切酶基因序列及上述核酸内切酶识别序列配置于上述一对前端粒酶识别序列间的同一区域内，上述目标核酸序列配置于上述一对前端粒酶识别序列间的其它区域内，且上述前端粒酶基因序列及上述核酸内切酶基因序列配置于可控制表达的启动子的控制下。

公开(公告)号：CN110088279A

公开(公告)日：2019-08-02

申请号：CN201780077983.0

申请日：2017-12-14

Applicant: 株式会社钟化

Inventor： 西辉之

IPC: C12N15/09 ,  C12N1/15 ,  C12N1/19 ,  C12N1/21 ,  C12N5/10 ,  C12P21/00

Abstract: 本发明所要解决的课题在于提供使宿主细胞的甲醇同化能力降低、且使目标蛋白质的生产率提高的新型方式。根据本发明，可以提供通过将本发明所述的基因失活而使甲醇同化能力降低的宿主细胞、提高了目标蛋白质的生产率的宿主细胞、以及用于将该基因失活的载体，从而解决上述课题。另外，本发明提供将该宿主细胞用作宿主的目标蛋白质的制造方法。