一种γ-聚谷氨酸降解酶及其制备方法

    公开(公告)号:CN114517193B

    公开(公告)日:2023-07-07

    申请号:CN202111607433.X

    申请日:2021-12-23

    Inventor: 周晗 陈宁 赖云

    Abstract: 本发明涉及生物基因工程技术领域,具体公开了一种γ‑聚谷氨酸降解酶及其制备方法。本发明的γ‑聚谷氨酸降解酶是由地衣芽孢杆菌γ‑聚谷氨酸降解酶的第181位脯氨酸突变为天冬氨酸所形成的。所述γ‑聚谷氨酸降解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明在地衣芽孢杆菌γ‑聚谷氨酸降解酶的基础上进行定点突变(第181位脯氨酸点突变为天冬氨酸),形成本发明的γ‑聚谷氨酸降解酶,可以有效提高γ‑聚谷氨酸降解酶的酶活,进一步提高γ‑聚谷氨酸的降解效率。

    一种植物悬浮细胞的保存方法

    公开(公告)号:CN114246176B

    公开(公告)日:2023-02-24

    申请号:CN202111517993.6

    申请日:2021-12-13

    Abstract: 本发明公开了一种植物悬浮细胞的保存方法,涉及植物细胞工程技术领域。方法步骤为:在植物悬浮细胞液中加入甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ‑聚谷氨酸,随后进行冷冻干燥,冻干程序包括三次冷冻、抽真空、三次干燥和二次解析操作,三次冷冻温度依次为0℃~5℃、‑18℃~‑25℃和‑50℃,三次干燥温度依次为‑30~‑25℃、‑15~‑10℃和‑5~0℃;二次解析干燥温度依次为10~15℃、20~25℃。本申请通过在植物细胞悬浮液中添加保存剂,同时冻干过程通过多个阶段性降温和升温干燥处理,让植物细胞长时间缓慢适应外界温度,保护细胞的活性,使得细胞复苏时间短、细胞活性高且保存时间长。

    一种γ-聚谷氨酸降解酶及其制备方法

    公开(公告)号:CN114517193A

    公开(公告)日:2022-05-20

    申请号:CN202111607433.X

    申请日:2021-12-23

    Inventor: 周晗 陈宁 赖云

    Abstract: 本发明涉及生物基因工程技术领域,具体公开了一种γ‑聚谷氨酸降解酶及其制备方法。本发明的γ‑聚谷氨酸降解酶是由地衣芽孢杆菌γ‑聚谷氨酸降解酶的第181位脯氨酸突变为天冬氨酸所形成的。所述γ‑聚谷氨酸降解酶的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。本发明在地衣芽孢杆菌γ‑聚谷氨酸降解酶的基础上进行定点突变(第181位脯氨酸点突变为天冬氨酸),形成本发明的γ‑聚谷氨酸降解酶,可以有效提高γ‑聚谷氨酸降解酶的酶活,进一步提高γ‑聚谷氨酸的降解效率。

    一种植物悬浮细胞的保存方法

    公开(公告)号:CN114246176A

    公开(公告)日:2022-03-29

    申请号:CN202111517993.6

    申请日:2021-12-13

    Abstract: 本发明公开了一种植物悬浮细胞的保存方法,涉及植物细胞工程技术领域。方法步骤为:在植物悬浮细胞液中加入甘露糖醇、海藻糖、甘油、卵磷脂、麦芽糊精、脱脂奶粉和γ‑聚谷氨酸,随后进行冷冻干燥,冻干程序包括三次冷冻、抽真空、三次干燥和二次解析操作,三次冷冻温度依次为0℃~5℃、‑18℃~‑25℃和‑50℃,三次干燥温度依次为‑30~‑25℃、‑15~‑10℃和‑5~0℃;二次解析干燥温度依次为10~15℃、20~25℃。本申请通过在植物细胞悬浮液中添加保存剂,同时冻干过程通过多个阶段性降温和升温干燥处理,让植物细胞长时间缓慢适应外界温度,保护细胞的活性,使得细胞复苏时间短、细胞活性高且保存时间长。

    一种植物外泌体的纯化方法

    公开(公告)号:CN114540271B

    公开(公告)日:2024-06-14

    申请号:CN202210205644.9

    申请日:2022-03-02

    Abstract: 本发明属于外泌体分离技术领域,公开了一种植物外泌体的纯化方法,以期克服现有方法中外泌体活性不足、分离提取量少、纯度不高的技术问题。本发明的植物外泌体的纯化方法包括:收集植物细胞破碎液,离心收集上清液;向上清液中加入沉淀液,得混合液;将混合液离心,弃上清,收集沉淀,加入PBS完全溶解沉淀,得溶解液;将溶解液进行凝胶过滤层析分离,即得外泌体。本发明的方法通过PEG8000沉淀与凝胶过滤层析联合实现大规模和高纯度外泌体的分离纯化,能够同时保证外泌体的含量、纯度、生物活性,所分离的外泌体产量高,纯度高;本发明的方法效率高,操作简单,易大规模生产。

    一种外泌体纯度检测方法

    公开(公告)号:CN115728410A

    公开(公告)日:2023-03-03

    申请号:CN202211373613.0

    申请日:2022-11-03

    Abstract: 本发明属于外泌体检测技术领域,公开了一种外泌体纯度检测方法,以期克服现有外泌体纯度检测方法无法兼顾检测成本和检测误差的技术问题。本发明的外泌体纯度检测方法采用HPLC检测外泌体纯度,包括以下步骤:平衡:用流动相平衡色谱柱至pH、电导率稳定;上样:上样量为20μL~100μL,柱温为20℃~25℃;洗脱:洗脱时间为20min~60min,检测器:紫外‑可见分光检测,检测波长210nm或280nm。本发明的方法采用通过调节特定的色谱柱洗脱参数,对外泌体纯度的检测误差小,且该方法有效降低了外泌体纯度检测所需的试剂及耗材成本,检测成本低,简单易操作。

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