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公开(公告)号：CN116218846A
公开(公告)日：2023-06-06
申请号：CN202211551559.4
申请日：2022-12-05
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/867 , C12N5/10
Abstract: 本发明公开了一种调控猪Ptrf基因表达的增强子序列的鉴定及其应用，猪Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统在293FT细胞中证实了该增强子活性，能显著增强Ptrf启动子的转录活性。后续，公开了在猪间充质干细胞中稳定转染dCas9‑KRAB‑sgRNA，构建Ptrf基因增强子表达抑制细胞株的方法，本发明基于CRIS PR/dCas9‑KRAB系统实现对Ptrf基因增强子的表达抑制，具有操作便利、干扰效率高的优势。这一Ptrf基因增强子序列可为后续制备调控脂肪含量的基因编辑猪提供技术支持。
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公开(公告)号：CN116356040A
公开(公告)日：2023-06-30
申请号：CN202310192092.7
申请日：2023-03-02
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/113 , C12N15/12 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种评价公猪精液精子活性的分子标记及应用，属于家畜分子标记制备技术领域。其分子标记为ssc‑miR‑26a‑5p，所述ssc‑miR‑26a‑5p的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明发现ssc‑miR‑26a‑5p与猪PTEN基因存在潜在结合位点，利用双荧光素酶报告系统和精液精子细胞转染试验验证了ssc‑miR‑26a‑5p与猪PTEN基因的靶标关系。ssc‑miR‑26a‑5p可作为评价公猪精液精子活性的分子标记，对猪育种改良有较好的应用前景。
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公开(公告)号：CN116179543A
公开(公告)日：2023-05-30
申请号：CN202210797706.X
申请日：2022-07-06
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , A01K67/027
Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR特异性靶向猪Cavin‑1基因的sgRNA及应用，利用CRISPR/Cas9系统选择Cavin‑1基因敲除靶点，设计sgRNA序列及其互补序列；形成双链DNA片段；与带有Cas9内切酶的表达载体连接，筛选阳性克隆，获得重组载体；重组载体电转染猪成纤维细胞，筛选阳性克隆细胞，阳性克隆细胞作为核供体细胞与去核卵母细胞融合得到重构胚胎，然后移植到发情母猪，全期发育获得Cavin‑1基因敲除的克隆猪。本发明利用CRISPR/Cas9的基因编辑技术，获得了Cavin‑1敲除猪，为研究肌肉发育及肌肉相关疾病提供了动物模型。
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公开(公告)号：CN107236822A
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201710675766.3
申请日：2017-08-09
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2563/107 , C12Q2545/101 , C12Q2525/207
Abstract: 本发明提供了一种将miRNA转染进猪精子并评估其转染效率的方法，主要步骤为：将稀释后的新鲜猪精液45度立于CO2培养箱中孵育1小时；用巴氏吸管吸出适量上层精子悬浮液；离心浓缩精子后加入等体积稀释液进行稀释；通过X‑tremeGENE siRNA Transfection转染试剂将miRNA转染进精子，将其放置在17℃保温箱上，转染6小时；通过离心沉淀精子，并使用Trizol LS抽提精子中的Total RNA；对抽提出的Total RNA进行miRNA反转以及相关miRNA的定量。该发明有利于日后进行精子转染miRNA的研究实验。
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公开(公告)号：CN114699066B
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202210349822.5
申请日：2022-04-02
Applicant: 四川农业大学
Abstract: 本发明提供一种检测生猪跛行的装置及其方法，包括步态采集步道，步态采集步道中间纵向的设有垂直的凸起；所述的步态采集步道最底部为玻璃板；玻璃板上留有空间，空间上方架设框架，框架上依次铺设压力印迹装置、柔性薄膜应力板、防滑防腐蚀轻薄橡胶垫；玻璃板下方设有两个相机；还包括数据采集处理系统和压力印迹归位装置、光电感应装置，将相机与柔性薄膜应力板连接数据采集处理系统，根据蹄形图像处理与薄膜应力板的压力信号，生猪以自然状态通过时候精准识别出生猪跛行姿态。本发明可以直观并全面地获取猪的蹄部印迹及压力数据，同时在数据处理系统中，对印迹图片进行图像识别，结合压力数据对生猪跛行的姿态和部位进行精准分析。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106544317B
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN201610975313.8
申请日：2016-11-07
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N5/076
Abstract: 本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。
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公开(公告)号：CN105779586B
公开(公告)日：2020-02-07
申请号：CN201511000193.1
申请日：2015-12-28
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明提供了一种从动物血浆中分离外泌体并进行纯度检测的方法，主要步骤为：首先用PBS溶液以1:1的比例稀释血浆；通过离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片；通过超高速离心沉淀外泌体；使用250μl PBS溶液悬浮外泌体；使用Trizol LS抽提外泌体悬浮液中的总RNA；对抽提出的总RNA进行poly(A)反转和相关基因的定量，并对纯度进行检测。该发明有利于日后对血浆外泌体内容物和外泌体相关功能的研究。
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公开(公告)号：CN106544317A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610975313.8
申请日：2016-11-07
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2509/00
Abstract: 本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。
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公开(公告)号：CN117821459B
公开(公告)日：2024-12-17
申请号：CN202410007547.8
申请日：2024-01-03
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/12 , A01K67/0276
Abstract: 本发明公开了一种Klrb1基因完全敲除的抗多杀性巴氏杆菌猪模型的构建方法，猪Klrb1基因完全敲除动物模型的打靶位点sgRNA核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。本发明利用高效精准的CRISPR/Cas9技术，通过电转染法构建了Klrb1基因完全敲除的的成纤维细胞系。加以体细胞核移植技术和胚胎移植技术获得Klrb1基因完全敲除基因编辑猪。获得的Klrb1基因完全敲除基因编辑猪，进行多杀性巴氏杆菌的抗毒实验验证，Klrb1完全敲除猪具有较强的抗毒能力。本发明基于CRISPR/Cas9基因编辑系统首次实现对猪Klrb1基因的完全缺失，本实验操作具有操作便利、敲除效率高的优势。
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公开(公告)号：CN118286428A
公开(公告)日：2024-07-05
申请号：CN202410382743.3
申请日：2024-04-01
Applicant: 四川农业大学
Abstract: 本发明公开了KLRB1基因编辑介导骨形成及其潜在应用，属于生物技术领域，本发明通过KLRB1基因敲除小鼠成骨细胞，激活ERK1/2通路从而促进成骨细胞增殖。KLRB1基因敲除小鼠骨质部增加，骨髓腔减少，促进骨形成。KLRB1基因敲除猪骨质部增加，骨髓腔减少，骨密度增加。基于此，本发明首次发现KLRB1基因敲除能促进哺乳动物骨质的形成，标志着哺乳动物KLRB1基因与骨分化形成有关，其可能成为骨质疏松，骨癌等疾病的药物治疗靶点和服务动物与人类骨健康的重要靶点。
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