公开(公告)号：CN116179543A

公开(公告)日：2023-05-30

申请号：CN202210797706.X

申请日：2022-07-06

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 龙科任 ,  李明洲 ,  钟志宁 ,  李晓开 ,  张宇

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/85 ,  C12N15/12 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR特异性靶向猪Cavin‑1基因的sgRNA及应用，利用CRISPR/Cas9系统选择Cavin‑1基因敲除靶点，设计sgRNA序列及其互补序列；形成双链DNA片段；与带有Cas9内切酶的表达载体连接，筛选阳性克隆，获得重组载体；重组载体电转染猪成纤维细胞，筛选阳性克隆细胞，阳性克隆细胞作为核供体细胞与去核卵母细胞融合得到重构胚胎，然后移植到发情母猪，全期发育获得Cavin‑1基因敲除的克隆猪。本发明利用CRISPR/Cas9的基因编辑技术，获得了Cavin‑1敲除猪，为研究肌肉发育及肌肉相关疾病提供了动物模型。

公开(公告)号：CN115896114B

公开(公告)日：2024-05-21

申请号：CN202310017283.X

申请日：2023-01-06

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 龙科任 ,  李明洲 ,  张宇 ,  李晓开 ,  曾莎 ,  钟志宁

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/867 ,  C12N15/53 ,  A01K67/0275

Abstract: 本发明公开了一种Ptrf基因增强子及其在脂肪沉积调控中的应用，鼠Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统证实该增强子，能在293细胞以及3T3‑L1细胞中显著增强鼠Ptrf基因启动子的转录活性。更重要的是，在鼠腹股沟脂肪组织中直接注射慢病毒浓缩液，增强子抑制对于小鼠的脂肪沉积性状产生了显著的改变。本发明基于CRISPR/dCas9‑KRAB系统实现对鼠Ptrf基因增强子的表达抑制，并首次通过慢病毒载体直接获得增强子表达抑制的动物模型，具有操作便利、干扰效率高的优势。

公开(公告)号：CN116179543B

公开(公告)日：2024-08-13

申请号：CN202210797706.X

申请日：2022-07-06

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 龙科任 ,  李明洲 ,  钟志宁 ,  李晓开 ,  张宇

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/0276 ,  C12N15/113 ,  C12N15/12 ,  C12N9/22

Abstract: 本发明公开了一种基于CRISPR特异性靶向猪Cavin‑1基因的sgRNA及应用，利用CRISPR/Cas9系统选择Cavin‑1基因敲除靶点，设计sgRNA序列及其互补序列；形成双链DNA片段；与带有Cas9内切酶的表达载体连接，筛选阳性克隆，获得重组载体；重组载体电转染猪成纤维细胞，筛选阳性克隆细胞，阳性克隆细胞作为核供体细胞与去核卵母细胞融合得到重构胚胎，然后移植到发情母猪，全期发育获得Cavin‑1基因敲除的克隆猪。本发明利用CRISPR/Cas9的基因编辑技术，获得了Cavin‑1敲除猪，为研究肌肉发育及肌肉相关疾病提供了动物模型。

公开(公告)号：CN115896114A

公开(公告)日：2023-04-04

申请号：CN202310017283.X

申请日：2023-01-06

Applicant: 四川农业大学

Inventor： 龙科任 ,  李明洲 ,  张宇 ,  李晓开 ,  曾莎 ,  钟志宁

IPC: C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/867 ,  C12N15/53 ,  A01K67/027

Abstract: 本发明公开了一种Ptrf基因增强子及其在脂肪沉积调控中的应用，鼠Ptrf基因增强子，其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。利用双荧光素酶报告系统证实该增强子，能在293细胞以及3T3‑L1细胞中显著增强鼠Ptrf基因启动子的转录活性。更重要的是，在鼠腹股沟脂肪组织中直接注射慢病毒浓缩液，增强子抑制对于小鼠的脂肪沉积性状产生了显著的改变。本发明基于CRISPR/dCas9‑KRAB系统实现对鼠Ptrf基因增强子的表达抑制，并首次通过慢病毒载体直接获得增强子表达抑制的动物模型，具有操作便利、干扰效率高的优势。