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公开(公告)号：CN107236822A
公开(公告)日：2017-10-10
申请号：CN201710675766.3
申请日：2017-08-09
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12Q1/68
CPC classification number: C12Q1/6851 , C12Q2563/107 , C12Q2545/101 , C12Q2525/207
Abstract: 本发明提供了一种将miRNA转染进猪精子并评估其转染效率的方法，主要步骤为：将稀释后的新鲜猪精液45度立于CO2培养箱中孵育1小时；用巴氏吸管吸出适量上层精子悬浮液；离心浓缩精子后加入等体积稀释液进行稀释；通过X‑tremeGENE siRNA Transfection转染试剂将miRNA转染进精子，将其放置在17℃保温箱上，转染6小时；通过离心沉淀精子，并使用Trizol LS抽提精子中的Total RNA；对抽提出的Total RNA进行miRNA反转以及相关miRNA的定量。该发明有利于日后进行精子转染miRNA的研究实验。
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公开(公告)号：CN106544317B
公开(公告)日：2021-02-23
申请号：CN201610975313.8
申请日：2016-11-07
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N5/076
Abstract: 本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。
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公开(公告)号：CN105779586B
公开(公告)日：2020-02-07
申请号：CN201511000193.1
申请日：2015-12-28
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12Q1/6851 , C12Q1/6806
Abstract: 本发明提供了一种从动物血浆中分离外泌体并进行纯度检测的方法，主要步骤为：首先用PBS溶液以1:1的比例稀释血浆；通过离心去除血浆中的细胞成分和细胞碎片；通过超高速离心沉淀外泌体；使用250μl PBS溶液悬浮外泌体；使用Trizol LS抽提外泌体悬浮液中的总RNA；对抽提出的总RNA进行poly(A)反转和相关基因的定量，并对纯度进行检测。该发明有利于日后对血浆外泌体内容物和外泌体相关功能的研究。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106544317A
公开(公告)日：2017-03-29
申请号：CN201610975313.8
申请日：2016-11-07
Applicant: 四川农业大学
IPC: C12N5/076
CPC classification number: C12N5/061 , C12N2509/00
Abstract: 本发明提供一种从猪精液中分离纯化精子细胞和外泌体的方法，步骤为：采集公猪精液按比例稀释，经过滤后离心分离沉淀和上清液；沉淀用体细胞裂解液裂解后再经离心沉降精子细胞得到精子细胞沉淀；上清液离心后保留上清，连续过滤除掉其中的细胞碎片，再通过超高速离心沉淀exosome，加入PBS溶液悬浮exosome。抽提精子细胞和exosome悬浮液中的总RNA，反转录mRNA和miRNA，并通过定量标记mRNA和miRNA对细胞和exosome纯度进行检测。本发明方法可提高猪精液精子细胞和exosome的分离准确率，并有效保证分离后的精子细胞和exosome的纯度，操作方法简单易行、杂质少。
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公开(公告)号：CN103609530B
公开(公告)日：2015-11-25
申请号：CN201310573458.1
申请日：2013-11-14
Applicant: 四川农业大学
IPC: A01K67/033
Abstract: 本发明涉及一种冬季非采暖系统猪牛粪混合养殖蚯蚓生产技术，包括以下技术要点：(1)猪牛粪混合体系的物料比例确定；(2)猪牛粪混合非采暖体系养殖蚯蚓的温度控制；(3)蚯蚓养殖物料置于40cm高的泡沫箱中，物料厚度20-25cm，箱体下部垫3cm直径的泡沫块和草以利透气，下底和上盖部各开一孔，下部开口连接塑料导气管到新鲜空气空间。将该箱体盖子以外部分埋入堆肥条垛上部，每天检查箱内物料温度和水分，使培养箱内基料维持在20-26℃，每天在表层添加适量培养料。该发明技术简单易行，高效节能，可以维持整个冬季蚯蚓高效养殖的能量需求，堆肥腐熟后又可作为下一次蚯蚓养殖的配料或继续堆至转化为优质有机肥。
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公开(公告)号：CN103103280A
公开(公告)日：2013-05-15
申请号：CN201310041295.2
申请日：2013-02-01
Applicant: 四川农业大学
Abstract: 本发明公开了一种基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，一种利用PCR技术对基因组多拷贝基因拷贝数的快速批量测定方法，本方法通过对同一组织DNA样本分别实施某些多拷贝基因和某已知单拷贝基因的PCR扩增并纯化产物，测定各基因PCR纯化产物的质量浓度后根据其核酸序列，将质量浓度换算成摩尔浓度，再分别以梯度稀释后的PCR产物以及组织DNA样本为模板通过同一RT-PCR反应制作这些基因的标准曲线同时获得各基因在DNA样品中的浓度，由于在同一抽提效率下，多拷贝基因的拷贝数就是在相同体积下多拷贝基因的数量除以单拷贝基因的数量，由此可以利用一次96孔RT-PCR反应测定同一生物个体中7个不同多拷贝基因的拷贝数；也可以利用一次384孔RT-PCR反应测定11个不同多拷贝基因的拷贝数，实现快速批量的测定效率。
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公开(公告)号：CN107023188A
公开(公告)日：2017-08-08
申请号：CN201611067494.0
申请日：2016-11-23
Applicant: 四川农业大学
CPC classification number: Y02A40/294 , E04H5/08 , A01G22/00 , A01K1/00
Abstract: 本发明涉及一种高原生态循环型藏猪养殖场，包括一个温室猪舍大棚、一个有机肥发酵大棚、三个蔬菜大棚和一个轮牧草场，温室猪舍大棚与各蔬菜大棚之间均设置有一气体循环系统；气体循环系统包括第一轴流风机、水帘、气体储存室、气体生物除臭器、分体空调，第一轴流风机通过第一通风管道连通于气体储存室内，蔬菜大棚内设置有可移动的移动式密封箱，移动式密封箱罩在气体储存室及气体生物除臭器上；蔬菜大棚、温室猪舍大棚内均固定有蓄水池，轮牧草场分隔成三个相同面积的轮牧区域。本发明还涉及高原生态循环型藏猪养殖工艺。本发明能够实现有机质循环、气体循环和水循环，在养分循环上能够达到零排放，有助于养殖藏猪、种植有机蔬菜和养护牧场。
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