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公开(公告)号：CN113113078A
公开(公告)日：2021-07-13
申请号：CN202110403637.5
申请日：2021-04-15
Applicant: 吉林大学
Abstract: 本发明公开的属于睾丸移植小鼠模型建立技术领域，具体为哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，其包括以下步骤：S1：研究所取用荷斯坦公牛的小牛睾丸，添加冷冻保护剂后于液氮中冻存；S2:将戊巴比妥钠麻醉剂和戊巴比妥钠粉末溶于生理盐水中，完全溶解后用滤器过滤，并在低温条件下保存。该哺乳动物冻存睾丸组织异种异位移植模型的构建方法，在未成熟哺乳动物优良种质资源的保护方面具有切实的应用意义，能在有效低温保存睾丸组织的前提下，以5周龄BALB/cNude免疫缺陷小鼠作为移植受体，结合基质胶的促血管生成作用，使得生精周期差异较大的鼠、牛种属间所移植的睾丸组织得以存活并基本保持正常的发育状态。
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公开(公告)号：CN109706114A
公开(公告)日：2019-05-03
申请号：CN201910130261.8
申请日：2019-02-21
Applicant: 吉林大学
Abstract: 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞诱导多能干细胞的方法，属于干细胞领域，包括如下步骤：步骤1、分离牛睾丸支持细胞；步骤2、培养牛睾丸支持细胞；步骤3、将编码Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4四种转录因子转入牛睾丸支持细胞中，产生多能性干细胞。与现有技术相比，本发明充分利用了牛睾丸支持细胞差异贴壁的特点，培养出了形态均一的牛睾丸支持细胞。由于牛睾丸支持细胞来自于肉用犊牛具有较高的重编程能力。以牛睾丸支持细胞代替牛成体成纤维细胞、间充质干细胞等作为来源细胞制备诱导多能干细胞，不仅细胞获取简便而且重编程率高。
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公开(公告)号：CN111304157A
公开(公告)日：2020-06-19
申请号：CN202010181822.X
申请日：2020-03-16
Applicant: 吉林大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 一种获得牛初始态诱导多能干细胞的方法，属于干细胞培养领域，将牛诱导多能干细胞在含有5％二氧化碳，温度37℃条件下培养3～4天，弃掉诱导培养基，用PBS缓冲液洗净，分散酶37℃下孵育，观察克隆边缘与饲养层细胞分离后，吸取消化液，加入诱导培养基，从饲养层细胞上刮取牛诱导多能干细胞；用0.05％的胰酶在37℃的条件下消化，加入1mL转化培养基重悬至1.5mL离心管中，1000rpm离心5min，接种至新鲜的饲养层上，并更换转化培养基进行培养，直至出现圆拱形，类似小鼠胚胎干细胞ESCs样的克隆即为牛初始态诱导多能干细胞。本发明解决了现有牛诱导多能干细胞的多能性不完全等问题。
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公开(公告)号：CN111304157B
公开(公告)日：2023-05-12
申请号：CN202010181822.X
申请日：2020-03-16
Applicant: 吉林大学
IPC: C12N5/074
Abstract: 一种获得牛初始态诱导多能干细胞的方法，属于干细胞培养领域，将牛诱导多能干细胞在含有5％二氧化碳，温度37℃条件下培养3～4天，弃掉诱导培养基，用PBS缓冲液洗净，分散酶37℃下孵育，观察克隆边缘与饲养层细胞分离后，吸取消化液，加入诱导培养基，从饲养层细胞上刮取牛诱导多能干细胞；用0.05％的胰酶在37℃的条件下消化，加入1mL转化培养基重悬至1.5mL离心管中，1000rpm离心5min，接种至新鲜的饲养层上，并更换转化培养基进行培养，直至出现圆拱形，类似小鼠胚胎干细胞ESCs样的克隆即为牛初始态诱导多能干细胞。本发明解决了现有牛诱导多能干细胞的多能性不完全等问题。
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公开(公告)号：CN111919836A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010829015.4
申请日：2020-08-18
Applicant: 吉林大学
IPC: A01N1/02
Abstract: 本发明适用于生物冻存技术领域，提供了一种牛睾丸组织的无血清冻存保护剂及冻存方法和应用，该无血清冻存保护剂包括以下组分：Knockout DMEM培养基、KSR血清替代物、二甲基亚砜、青链霉素。本发明通过以不含血清的Knockout DMEM培养基作为基质，联合使用KSR血清替代物、二甲基亚砜和青链霉素作为低温保护剂，不仅可以降低冻存保护剂的成本和避免了外源性病原体及病毒污染的风险，而且还能长期低温保存牛睾丸组织，减少细胞凋亡，维持组织形态，较好的保护了生精细胞和睾丸体细胞，使得冻存复苏后的睾丸组织结构完整、各类睾丸细胞的活性高，可正常增殖、发育。
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