公开(公告)号：CN111304157B

公开(公告)日：2023-05-12

申请号：CN202010181822.X

申请日：2020-03-16

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张学明 ,  姜禹 ,  李子义 ,  朱文倩 ,  蔡宁宁 ,  汪正铸 ,  安星兰 ,  杨蕊

IPC: C12N5/074

Abstract: 一种获得牛初始态诱导多能干细胞的方法，属于干细胞培养领域，将牛诱导多能干细胞在含有5％二氧化碳，温度37℃条件下培养3～4天，弃掉诱导培养基，用PBS缓冲液洗净，分散酶37℃下孵育，观察克隆边缘与饲养层细胞分离后，吸取消化液，加入诱导培养基，从饲养层细胞上刮取牛诱导多能干细胞；用0.05％的胰酶在37℃的条件下消化，加入1mL转化培养基重悬至1.5mL离心管中，1000rpm离心5min，接种至新鲜的饲养层上，并更换转化培养基进行培养，直至出现圆拱形，类似小鼠胚胎干细胞ESCs样的克隆即为牛初始态诱导多能干细胞。本发明解决了现有牛诱导多能干细胞的多能性不完全等问题。

公开(公告)号：CN117265010A

公开(公告)日：2023-12-22

申请号：CN202310892663.8

申请日：2023-07-20

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张学明 ,  陈斓歆 ,  姜禹 ,  杨蕊 ,  张博洋 ,  朱春玲 ,  王玥琦 ,  张言 ,  唐博

IPC: C12N15/867 ,  C12N15/65 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: 本发明一种用牛源6因子从牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMEC)制备iPSCs的方法，属于干细胞培养技术领域；该干细胞是通过逆转录病毒异位表达牛源OCT4、SOX2、KLF4、C‑MYC、NANOG和LINL28A转录因子，重编程牛乳腺上皮细胞获得的。具体方法包括以下步骤：1.维持牛多能性基因的逆转录病毒载体的构建；2.逆转录病毒的构建；3.逆转录病毒感染bMEC；4.牛iPSCs的获得。本发明构建了含有牛OCT4、SOX2、KLF4、C‑MYC、NANOG和LINK28A基因的六种逆转录病毒，并使用这6种逆转录病毒感染bMEC，使其诱导成biPSCs。与以往的方法相比，尽可能的规避了所获牛iPSCs外源基因沉默不完全的风险，使用该方法有望获得重编程更完全的牛iPSCs。

公开(公告)号：CN111304157A

公开(公告)日：2020-06-19

申请号：CN202010181822.X

申请日：2020-03-16

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张学明 ,  姜禹 ,  李子义 ,  朱文倩 ,  蔡宁宁 ,  汪正铸 ,  安星兰 ,  杨蕊

IPC: C12N5/074

Abstract: 一种获得牛初始态诱导多能干细胞的方法，属于干细胞培养领域，将牛诱导多能干细胞在含有5％二氧化碳，温度37℃条件下培养3～4天，弃掉诱导培养基，用PBS缓冲液洗净，分散酶37℃下孵育，观察克隆边缘与饲养层细胞分离后，吸取消化液，加入诱导培养基，从饲养层细胞上刮取牛诱导多能干细胞；用0.05％的胰酶在37℃的条件下消化，加入1mL转化培养基重悬至1.5mL离心管中，1000rpm离心5min，接种至新鲜的饲养层上，并更换转化培养基进行培养，直至出现圆拱形，类似小鼠胚胎干细胞ESCs样的克隆即为牛初始态诱导多能干细胞。本发明解决了现有牛诱导多能干细胞的多能性不完全等问题。

公开(公告)号：CN111919836A

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN202010829015.4

申请日：2020-08-18

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张学明 ,  朱文倩 ,  姜禹 ,  蔡宁宁 ,  杨蕊 ,  石建忠

IPC: A01N1/02

Abstract: 本发明适用于生物冻存技术领域，提供了一种牛睾丸组织的无血清冻存保护剂及冻存方法和应用，该无血清冻存保护剂包括以下组分：Knockout DMEM培养基、KSR血清替代物、二甲基亚砜、青链霉素。本发明通过以不含血清的Knockout DMEM培养基作为基质，联合使用KSR血清替代物、二甲基亚砜和青链霉素作为低温保护剂，不仅可以降低冻存保护剂的成本和避免了外源性病原体及病毒污染的风险，而且还能长期低温保存牛睾丸组织，减少细胞凋亡，维持组织形态，较好的保护了生精细胞和睾丸体细胞，使得冻存复苏后的睾丸组织结构完整、各类睾丸细胞的活性高，可正常增殖、发育。

公开(公告)号：CN109706114A

公开(公告)日：2019-05-03

申请号：CN201910130261.8

申请日：2019-02-21

Applicant: 吉林大学

Inventor： 张学明 ,  姜禹 ,  李子义 ,  安星兰 ,  蔡宁宁 ,  张胜 ,  赵欣欣 ,  朱文倩 ,  唐博

IPC: C12N5/074 ,  C12N5/071

Abstract: 本发明公开了一种牛睾丸支持细胞诱导多能干细胞的方法，属于干细胞领域，包括如下步骤：步骤1、分离牛睾丸支持细胞；步骤2、培养牛睾丸支持细胞；步骤3、将编码Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4四种转录因子转入牛睾丸支持细胞中，产生多能性干细胞。与现有技术相比，本发明充分利用了牛睾丸支持细胞差异贴壁的特点，培养出了形态均一的牛睾丸支持细胞。由于牛睾丸支持细胞来自于肉用犊牛具有较高的重编程能力。以牛睾丸支持细胞代替牛成体成纤维细胞、间充质干细胞等作为来源细胞制备诱导多能干细胞，不仅细胞获取简便而且重编程率高。