公开(公告)号：CN115043897B

公开(公告)日：2025-03-25

申请号：CN202210686277.9

申请日：2022-06-16

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 黄微 ,  黄琪 ,  景成宇 ,  廖经练 ,  刘丽霞

IPC: C07K1/16 ,  C07K14/78

Abstract: 本发明提供了一种去除重组蛋白内毒素的方法，包括步骤S1、对第一填料柱进行第一预处理；步骤S2、上样；步骤S3、去除待处理样品中的内毒素，先采用第二平衡液冲洗上样后的第一填料柱，直至流穿液280nm紫外吸收回到基线，再采用体积分数为10％‑60％的异丙醇冲洗上样后的第一填料柱，直至流穿液280nm紫外吸收回到基线，以去除待处理样品中的内毒素，获得结合在第一填料柱上的粗制蛋白；所述第二平衡液包括体积分数为0.5％‑1.25％的曲拉通X‑114。本发明将TritonX‑114与异丙醇组合使用，以提高对内毒素的去除率，且降低去除成本。

公开(公告)号：CN114854809B

公开(公告)日：2023-10-31

申请号：CN202210613419.9

申请日：2022-05-31

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 黄琪 ,  黄微 ,  景成宇 ,  廖经练 ,  刘丽霞

IPC: C12P21/02 ,  C07K14/78 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种微氧诱导大肠杆菌发酵重组类人源胶原蛋白质的方法，包括菌种活化、种子液的培养和分批补料发酵，其特征在于，所述分批补料发酵的过程包括：细胞快速繁殖阶段：将二级种子液接种至基础发酵培养基中进行培养；在培养过程中，溶氧维持在30％‑33％，通过向发酵液中补加第一种补料培养基来控制基因工程菌的比生长速率在0.1‑0.5之间；微氧诱导表达重组蛋白阶段：向发酵液中流加乳糖诱导基因工程菌表达蛋白，并将第一种补料培养基更换为第二种补料培养基；根据发酵液中的溶氧量进行反馈补料以及流加乳糖诱导剂，溶氧维持在0％‑5％，直至发酵结束。

公开(公告)号：CN114958789A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210566524.1

申请日：2022-05-23

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 景成宇 ,  黄琪 ,  俞志豪

IPC: C12N9/04

Abstract: 本发明提供一种葡萄糖脱氢酶突变体，该葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示，该葡萄糖脱氢酶突变体通过将位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变成苯丙氨酸得到，既能提高底物专一性，又能保持良好的最大反应速率。本发明还提供一种葡萄糖脱氢酶突变体的制备方法，具体是将海枣曲霉中位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变得到。本发明还提供一种含上述葡萄糖脱氢酶突变体的组合物。本发明还公开了上述葡萄糖脱氢酶突变体在血糖检测中的应用。

公开(公告)号：CN114958789B

公开(公告)日：2023-08-29

申请号：CN202210566524.1

申请日：2022-05-23

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 景成宇 ,  黄琪 ,  俞志豪

IPC: C12N9/04

Abstract: 本发明提供一种葡萄糖脱氢酶突变体，该葡萄糖脱氢酶突变体的氨基酸序列如SEQ IDNO.4所示，该葡萄糖脱氢酶突变体通过将位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变成苯丙氨酸得到，既能提高底物专一性，又能保持良好的最大反应速率。本发明还提供一种葡萄糖脱氢酶突变体的制备方法，具体是将海枣曲霉中位于362位和位于428位的酪氨酸进行突变得到。本发明还提供一种含上述葡萄糖脱氢酶突变体的组合物。本发明还公开了上述葡萄糖脱氢酶突变体在血糖检测中的应用。

公开(公告)号：CN115043897A

公开(公告)日：2022-09-13

申请号：CN202210686277.9

申请日：2022-06-16

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 黄微 ,  黄琪 ,  景成宇 ,  廖经练 ,  刘丽霞

IPC: C07K1/16 ,  C07K14/78

Abstract: 本发明提供了一种去除重组蛋白内毒素的方法，包括步骤S1、对第一填料柱进行第一预处理；步骤S2、上样；步骤S3、去除待处理样品中的内毒素，先采用第二平衡液冲洗上样后的第一填料柱，直至流穿液280nm紫外吸收回到基线，再采用体积分数为10％‑60％的异丙醇冲洗上样后的第一填料柱，直至流穿液280nm紫外吸收回到基线，以去除待处理样品中的内毒素，获得结合在第一填料柱上的粗制蛋白；所述第二平衡液包括体积分数为0.5％‑1.25％的曲拉通X‑114。本发明将TritonX‑114与异丙醇组合使用，以提高对内毒素的去除率，且降低去除成本。

公开(公告)号：CN114854809A

公开(公告)日：2022-08-05

申请号：CN202210613419.9

申请日：2022-05-31

Applicant: 可孚医疗科技股份有限公司

Inventor： 黄琪 ,  黄微 ,  景成宇 ,  廖经练 ,  刘丽霞

IPC: C12P21/02 ,  C07K14/78 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供了一种微氧诱导大肠杆菌发酵重组类人源胶原蛋白质的方法，包括菌种活化、种子液的培养和分批补料发酵，其特征在于，所述分批补料发酵的过程包括：细胞快速繁殖阶段：将二级种子液接种至基础发酵培养基中进行培养；在培养过程中，溶氧维持在30％‑33％，通过向发酵液中补加第一种补料培养基来控制基因工程菌的比生长速率在0.1‑0.5之间；微氧诱导表达重组蛋白阶段：向发酵液中流加乳糖诱导基因工程菌表达蛋白，并将第一种补料培养基更换为第二种补料培养基；根据发酵液中的溶氧量进行反馈补料以及流加乳糖诱导剂，溶氧维持在0％‑5％，直至发酵结束。