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公开(公告)号：CN118546965A
公开(公告)日：2024-08-27
申请号：CN202410625441.4
申请日：2024-05-20
申请人： 厦门大学
摘要： 一种用于提高大肠杆菌生物合成靛玉红产物选择性的方法，涉及酶工程及发酵工程领域。包括：1)定向进化：通过对野生型黄素单加氧酶fmo随机突变，结合高通量筛选方法，定向进化出具有更高酶活及酶催化选择性的突变体fmo5B4；2)基因表达载体的构建：利用酶切连接技术将突变体fmo5B4插入表达质粒中，对表达质粒进行启动子及核糖体结合位点更换；3)大肠杆菌转染和表达：将改造后的表达质粒转入大肠杆菌宿主细胞中，通过诱导表达使突变体fmo5B4得以表达；4)发酵条件优化：大肠杆菌在摇瓶中发酵，发酵过程中对发酵体系内溶解氧含量和pH值进行控制，以确保酶活性和产物稳定，提高靛玉红的选择性。提高靛玉红的生产效率。
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公开(公告)号：CN115975823B
公开(公告)日：2024-07-30
申请号：CN202210986944.5
申请日：2022-08-17
申请人： 厦门大学
IPC分类号： C12N1/15 , C12N15/80 , C12P7/6434 , C12R1/645
摘要： 本发明公开了敲除磷脂酶D基因的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用。本发明采用裂殖壶菌Schizochytrium limacinum SR21为原始菌株，通过基因工程手段在大肠杆菌中构建敲除载体，以PLD基因的上下游序列作为同源臂，以博来霉素基因替换PLD基因并作为筛选抗性基因，得到一株高产DHA的基因工程菌株，为基因工程调控裂殖壶菌高产DHA提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN115305207B
公开(公告)日：2024-04-12
申请号：CN202210768232.6
申请日：2022-07-01
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明公开了一种全合成培养基、制备方法及其用于三孢布拉氏霉菌的培养方法。该全合成培养基包括碳源、氮源、维生素、无机盐和增稠剂；其中，所述增稠剂为羧甲基纤维素钠1～15g/L，所述羧甲基纤维素钠同时作为碳源组分之一和三孢布拉氏霉无法快速降解的增稠剂，能够维持发酵液在一定粘度，通过其他组分的调配促进三孢布拉氏霉的生长，调节其菌丝形态和菌丝球形态，提高发酵体系对溶解氧的利用率。另外，本发明提供了一种基于此培养基对三孢布拉氏霉菌的培养方法，进行发酵培养和积累类胡萝卜素，使用补料的方式、结合菌体生长变化对发酵过程进行调控，使用合成酯类流加底物促进类胡萝卜素在三孢布拉氏霉中的积累。
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公开(公告)号：CN117801968A
公开(公告)日：2024-04-02
申请号：CN202311560651.1
申请日：2023-11-21
申请人： 厦门大学
IPC分类号： C12N1/15 , C12N15/80 , C12N15/54 , C12P7/6427 , C12P7/6434 , C12R1/645
摘要： 本发明提供了一种过表达磷酸胆碱胞苷转移酶基因的基因工程菌及其构建方法和应用，所述基因工程菌是在出发菌中过表达磷酸胆碱胞苷转移酶基因CCT得到；所述出发菌为裂殖壶菌S.limacinum SR21；所述磷酸胆碱胞苷转移酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。该工程菌的总油脂和磷脂含量均显著增加，多不饱和脂肪酸积累增加，在保持细胞干重不变的情况下，油脂含量增加了20％，PUFAs含量增加了15％，为调控裂殖壶菌提高脂肪酸合成提供了理论依据。
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公开(公告)号：CN117106748A
公开(公告)日：2023-11-24
申请号：CN202311074904.4
申请日：2023-08-24
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明提供了一种磷脂酶D突变体及其应用，该突变体相较于如SEQ ID NO：1所示野生型磷脂酶D的氨基酸序列，所述突变体具有第381位点的突变。该突变体使得酶催化生产磷脂酰甘油的产率得到提高，该突变体的水解酶活明显下降，有利于减少合成生产稀有磷脂PG时的水解副反应，该突变体转磷脂酰基酶活明显提高，具有更高的工业应用价值。
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公开(公告)号：CN113265340B
公开(公告)日：2023-02-28
申请号：CN202110546695.3
申请日：2021-05-19
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明公开了产角鲨烯的裂殖壶菌基因工程菌株及其构建方法和应用。本发明采用裂殖壶菌Schizochytrium limacinum SR21为野生型菌株，在大肠杆菌中构建以延长酶基因(elogase，elo1)两端序列为同源臂、博来霉素为筛选标记的elo1基因敲除载体pBlue‑ZEO‑elo1和以18sRNA为同源臂、潮霉素为筛选标记的磷脂酸磷酸酶基因(phosphatidic acid phosphatase，pap)干扰载体pBlue‑HYG‑siRNA‑18s，将两个载体同源重组结构域线性化后电转进入裂殖壶菌内，得到一株elo1基因敲除结合pap基因干扰的高产角鲨烯的裂殖壶菌基因工程菌株，命名为MIX菌株。本发明通过调控相关基因的表达水平改变了碳代谢流向，抑制了裂殖壶菌油脂合成的能力，为角鲨烯合成提供了更多的碳通量。本发明为裂殖壶菌实现多基因改造提供了理论依据，同时为裂殖壶菌生产角鲨烯奠定了实验基础。
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公开(公告)号：CN114921395A
公开(公告)日：2022-08-19
申请号：CN202210574619.8
申请日：2022-05-25
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明公开了用CRISPR‑Cas9技术构建的重组大肠杆菌及其在制备磷脂酶D中的应用。本发明涵盖敲除三个海藻糖酶基因treA、treC及treF构建耐盐菌株和磷脂酶D表达菌株及优化磷脂酶D表达条件两部分。所述磷脂酶D表达菌株构建采用质粒pBADKP‑pld2，优化表达条件包含诱导条件优化、培养基优化、氯化钠及氯化镁胁迫。在优选的表达条件下，一方面获得高水平磷脂酶D产量，另一方面极大地减少了磷脂酶D的细胞泄露问题，维持细胞的表达活性。本发明能实现短时间内磷脂酶D高表达，具有优良的时空产率。
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公开(公告)号：CN111849933B
公开(公告)日：2022-01-14
申请号：CN202010800001.X
申请日：2020-08-11
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明提供了一种亮氨酸脱氢酶突变体及其构建方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明所述突变体是由野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列突变而来，所述野生型亮氨酸脱氢酶氨基酸序列第89位的赖氨酸饱和突变为NNN或第122位的丙氨酸定点突变为甘氨酸，所述野生型亮氨酸脱氢酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。实验结果表明：K89T亮氨酸脱氢酶对Asn和Thr表现出一定活性，A122G亮氨酸脱氢酶对Phe、His、Met表现一定活性，而野生型亮氨酸脱氢酶对这些氨基酸完全无活性；并且，K89T亮氨酸脱氢酶对于Asp氧化脱氨反应的酶活是野生型亮氨酸脱氢酶的2倍。
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公开(公告)号：CN110846091B
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN201910971072.3
申请日：2017-06-06
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明涉及草酸酯类新型含氧燃油或燃油添加剂及其应用，具体地提出了草酸酯类新型含氧燃油或燃油添加剂燃油新体系，草酸酯及其含草酸酯混合物作为燃料的用途和提高燃料在燃烧性能方面的用途和降低燃料对环境污染的用途。本发明的草酸酯类化合物或组合物可实现有效替代目前主流燃油的目的，并且能够有效提高目前工业燃料油和民用燃料的燃烧性能和降低环境污染。
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公开(公告)号：CN109136207B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201810843255.2
申请日：2018-07-27
申请人： 厦门大学
摘要： 本发明公开了一种重组大肠杆菌生产磷脂酶D的方法，将磷脂酶D基因置于严谨型启动子控制下，在表达质粒中插入pSC101的par区域，同时使用大肠杆菌recA突变株保持质粒的遗传稳定，生长期富集含质粒的细胞培养至高密度，诱导期饱和诱导，同时降低温度和施加碱金属盐胁迫，缓解PLD对宿主的细胞毒性，抑制细胞裂解，延长PLD的合成时间，从而提高PLD的表达。
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