公开(公告)号：CN118546965A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202410625441.4

申请日：2024-05-20

申请人： 厦门大学

发明人： 邵文尧 ,  王昱钧 ,  陈思凡 ,  卢英华 ,  陈玉清 ,  陈翠雪

IPC分类号： C12N15/70 ,  C12N15/53 ,  C12N1/21 ,  C12P17/10 ,  C12R1/19

摘要： 一种用于提高大肠杆菌生物合成靛玉红产物选择性的方法，涉及酶工程及发酵工程领域。包括：1)定向进化：通过对野生型黄素单加氧酶fmo随机突变，结合高通量筛选方法，定向进化出具有更高酶活及酶催化选择性的突变体fmo5B4；2)基因表达载体的构建：利用酶切连接技术将突变体fmo5B4插入表达质粒中，对表达质粒进行启动子及核糖体结合位点更换；3)大肠杆菌转染和表达：将改造后的表达质粒转入大肠杆菌宿主细胞中，通过诱导表达使突变体fmo5B4得以表达；4)发酵条件优化：大肠杆菌在摇瓶中发酵，发酵过程中对发酵体系内溶解氧含量和pH值进行控制，以确保酶活性和产物稳定，提高靛玉红的选择性。提高靛玉红的生产效率。