一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用

    公开(公告)号:CN108359630B

    公开(公告)日:2021-07-02

    申请号:CN201810324073.4

    申请日:2018-04-12

    申请人: 南开大学

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/85 C12R1/385

    摘要: 一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用。构建方法是,将铜绿假单胞菌Δ8菌株中参与细胞壁肽聚糖合成的谷氨酸消旋酶基因murI删除,从而获得D‑谷氨酸营养缺陷型菌株Δ9。其应用是,Δ9菌株无细胞毒性并保留有完好的III型分泌系统(T3SS),可将外源蛋白质通过其T3SS高效地注入到哺乳动物细胞中,能够应用于哺乳动物细胞蛋白质转染。Δ9在缺少D‑谷氨酸的培养环境中无法生长,因此,转染后该菌可通过D‑谷氨酸营养限制自行清除。我们分别利用HeLa细胞和小鼠感染模型阐释了该菌体外和体内应用的安全性。本发明对于开发安全、高效的哺乳动物细胞蛋白质转染技术有着积极的意义。

    铜绿假单胞菌泳动能力相关基因PA5001及应用

    公开(公告)号:CN101368184A

    公开(公告)日:2009-02-18

    申请号:CN200810152282.1

    申请日:2008-10-10

    申请人: 南开大学

    IPC分类号: C12N15/31

    摘要: 本发明公开了铜绿假单胞菌泳动能力相关基因PA5001。属于微生物生物技术领域。此基因大小为957bp,目前国际上对该基因的功能尚没有报道,本实验首次发现其参与菌体的泳动能力。铜绿假单胞菌的泳动(swimming motility)是鞭毛介导的一种运动方式。本实验发现该基因的失活导致铜绿假单胞菌泳动能力丧失。铜绿假单胞菌的鞭毛及其所介导的运动能力是该菌的重要的毒力因子及致病因素。对该基因的发现及研究有助于研究铜绿假单胞菌鞭毛的运动机制,揭示铜绿假单胞菌的致病机理,为预防和治疗该菌引起的感染提供理论依据。

    一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用

    公开(公告)号:CN108359630A

    公开(公告)日:2018-08-03

    申请号:CN201810324073.4

    申请日:2018-04-12

    申请人: 南开大学

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/85 C12R1/385

    摘要: 一株减毒铜绿假单胞菌的构建方法及其在蛋白质转染中的应用。构建方法是,将铜绿假单胞菌Δ8菌株中参与细胞壁肽聚糖合成的谷氨酸消旋酶基因murI删除,从而获得D-谷氨酸营养缺陷型菌株Δ9。其应用是,Δ9菌株无细胞毒性并保留有完好的III型分泌系统(T3SS),可将外源蛋白质通过其T3SS高效地注入到哺乳动物细胞中,能够应用于哺乳动物细胞蛋白质转染。Δ9在缺少D-谷氨酸的培养环境中无法生长,因此,转染后该菌可通过D-谷氨酸营养限制自行清除。我们分别利用HeLa细胞和小鼠感染模型阐释了该菌体外和体内应用的安全性。本发明对于开发安全、高效的哺乳动物细胞蛋白质转染技术有着积极的意义。

    一种用于哺乳动物细胞蛋白质递送工程菌株的构建方法及应用

    公开(公告)号:CN107099495A

    公开(公告)日:2017-08-29

    申请号:CN201710242405.X

    申请日:2017-04-14

    申请人: 南开大学

    IPC分类号: C12N1/21 C12N15/85 C12R1/385

    摘要: 本发明涉及一种用于哺乳动物细胞蛋白质递送的基因工程菌株的构建方法及其应用。构建方法是,将铜绿假单胞菌PAK菌株基因组中4种毒力因子exoS,exoT,exoY,ndk基因删除,使其对哺乳动物细胞无细胞毒性;进一步从染色体上删除抑制细菌III型分泌系统(T3SS)的popN基因,使其T3SS介导的蛋白质注入量显著提高,从而构建出工程菌株Δ5。本发明构建的工程菌株Δ5可用于对多种哺乳动物细胞系实施蛋白质递送,进行基因编辑,细胞重编程,蛋白质功能研究等工作。可实施递送的细胞类型广泛,包括人和鼠的皮肤细胞、肌细胞、肠道细胞、肝细胞、多能干细胞等。

    铜绿假单胞菌水解弹性蛋白能力相关基因PA5022及其应用

    公开(公告)号:CN101643741A

    公开(公告)日:2010-02-10

    申请号:CN200910070372.0

    申请日:2009-09-08

    申请人: 南开大学

    摘要: 本发明公开了铜绿假单胞菌水解弹性蛋白能力相关基因PA5022及其应用。属于微生物生物技术领域。此基因大小为3357bp,其核苷酸序列如序列表序列1所示。目前国际上对该基因的功能尚没有确切报道。铜绿假单菌的弹性蛋白酶是一种锌金属蛋白酶,能够水解弹性蛋白,本发明发现PA5022基因的失活导致铜绿假单胞菌水解弹性蛋白的能力降低。铜绿假单菌的弹性蛋白酶是该菌的重要的毒力因子及致病因素。对该基因的发现及研究有助于研究铜绿假单胞菌弹性蛋白酶的合成与调控机制,揭示铜绿假单胞菌的致病机理,为预防和治疗该菌引起的感染提供理论依据。