公开(公告)号：CN116555403A

公开(公告)日：2023-08-08

申请号：CN202310176803.1

申请日：2023-02-28

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 管放 ,  杨亦桦 ,  武淑文 ,  吴益东

IPC: C12Q1/6858 ,  C12N15/11 ,  C12Q1/6888 ,  G16B25/20 ,  G16B20/30 ,  G16B20/50 ,  G16B40/00

Abstract: 本发明涉及检测棉铃虫对有机磷类杀虫剂靶标抗性的方法。采用根据棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因设计的特异性引物，以棉铃虫种群成虫后足混合提取的基因组DNA为模板，进行乙酰胆碱酯酶基因片段的带标签PCR扩增，利用Illumina测序平台以PE250测序策略对目标片段纯化产物进行测序，对测序数据依次进行质量控制、标签分选、双端数据拼接、序列比对和单倍型频率分析，可以同时检测多个种群样本的抗性等位基因频率。本发明借助下一代测序技术高通量的特点，对标签化的基因片段进行测序，具有快速简便、准确性高的优点，专用于棉铃虫对有机磷类杀虫剂抗性靶标突变的监测和预警。

公开(公告)号：CN119410707A

公开(公告)日：2025-02-11

申请号：CN202411250514.2

申请日：2024-09-06

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴益东 ,  李林 ,  杨亦桦 ,  王兴亮 ,  施雨 ,  管放

IPC: C12N15/85 ,  A01K67/34 ,  C12N15/57 ,  C12N15/113 ,  C12Q1/6888 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及用于构建棉铃虫雄性不育系的方法及涉及的转化事件。一种构建棉铃虫雄性不育系的方法。将含有Chr16‑Vasa‑Cas9转化事件的棉铃虫与含有Chr5‑U6‑S2sgRNA转化事件的棉铃虫杂交，获得共表达Cas9和sgRNA的杂交F1代棉铃虫后，棉铃虫表现出雄性不育表型，同时没有其他适合度代价，即其交配成功率、交配时间和产卵量均没有发生显著变化。本发明一方面为构建棉铃虫雄性不育系提供了两种优选的转化事件，为开发无抗性风险且绿色环保的棉铃虫高效防治策略奠定了坚实的基础；同时提供了对这两种转化事件进行分子鉴定的方法，为对其进行身份识别以及对转基因棉铃虫进行追溯和监管提供了重要的科学依据。

公开(公告)号：CN113293215A

公开(公告)日：2021-08-24

申请号：CN202010112224.7

申请日：2020-02-24

Applicant: 南京农业大学

Inventor： 吴益东 ,  王兴亮 ,  管放 ,  杨亦桦 ,  武淑文

IPC: C12Q1/6888 ,  C12N15/11 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明公开了草地贪夜蛾对苏云金芽孢杆菌Bt Cry1F毒素抗性基因的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对草地贪夜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定草地贪夜蛾个体腺苷三磷酸(ATP)结合盒转运蛋白C2基因第15号外显子是否发生了12‑bp的碱基插入，且一次性区分出所述抗性基因的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点，专用于草地贪夜蛾对Bt Cry1F毒素抗性的分子检测和早期预警。