一种用于在棉铃虫体内验证目的基因生物功能的系统及其应用

    公开(公告)号:CN117925708A

    公开(公告)日:2024-04-26

    申请号:CN202311563451.1

    申请日:2023-11-22

    Inventor: 吴益东 施雨 李林

    Abstract: 本发明涉及一种用于在棉铃虫体内验证目的基因生物功能的系统及其应用。一种用于在棉铃虫体内验证目的基因生物功能的系统,由以下组分组成:(1)piggyBac转座酶的mRNA;(2)过表达目的基因的piggyBac转座质粒。主要通过显微注射的方式将piggyBac转座酶的mRNA和转座质粒一同注射入棉铃虫的新鲜胚胎中,其中,转座质粒中不仅包含目的基因表达盒,也包含标记基因表达盒,所以,本发明通过筛选后代中具有EGFP荧光信号的幼虫,来构建转基因棉铃虫品系。再通过生物测定等实验来检测转基因棉铃虫对杀虫剂敏感性的变化,从而鉴定和预测目的基因的功能。

    棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法

    公开(公告)号:CN103014159A

    公开(公告)日:2013-04-03

    申请号:CN201210524000.2

    申请日:2012-12-07

    Abstract: 本发明公开了棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法。该检测方法共分3个主要步骤,第一步:分别提取棉铃虫样品的基因组DNA;第二步:进行特定钙粘蛋白胞质区片段的PCR扩增;第三步:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳图谱,可以准确鉴定基因型,并以此判断不同种群的抗性基因频率。本发明方法不需饲养试虫,节省劳动力和资源,可以快速、准确检测出棉铃虫的基因型,单个试虫仅需数小时,采集鉴定田间种群的抗性个体频率也只需几周时间,鉴定结果可及时对棉铃虫的有效抗性治理提供正确指导。

    小菜蛾对阿维菌素靶标抗性的分子检测方法

    公开(公告)号:CN105713959B

    公开(公告)日:2019-04-19

    申请号:CN201410720089.9

    申请日:2014-12-01

    Abstract: 本发明公开了小菜蛾对阿维菌素靶标抗性的分子检测方法。采用根据小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因序列设计的特异性引物,以提取的小菜蛾单头基因组DNA为模板,进行谷氨酸氯离子通道基因片段的PCR扩增,分析目标片段纯化产物直接测序色谱图即可区分小菜蛾个体的基因型(敏感纯合子SS、抗性杂合子RS和抗性纯合子RR),检测种群样本的抗性等位基因突变频率。本发明涵盖小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因A309V突变的检测方法及专用引物序列,该方法具有快速简便、准确性高的优点,可用于监测小菜蛾田间种群对阿维菌素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态,为调整小菜蛾化学防治策略、制订延缓抗性发展措施提供重要依据。

    小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法

    公开(公告)号:CN105624278B

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201410720320.4

    申请日:2014-12-01

    Abstract: 本发明公开了小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增,对PCR纯化产物直接测序,根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道在编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型,一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点,专用于小菜蛾对钠离子通道阻断剂(茚虫威和氰氟虫腙)抗性的监测和预警。

    小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法

    公开(公告)号:CN105624278A

    公开(公告)日:2016-06-01

    申请号:CN201410720320.4

    申请日:2014-12-01

    Abstract: 本发明公开了小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增,对PCR纯化产物直接测序,根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道在编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型,一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点,专用于小菜蛾对钠离子通道阻断剂(茚虫威和氰氟虫腙)抗性的监测和预警。

    分子检测小菜蛾对多杀霉素抗性的方法及引物对

    公开(公告)号:CN106939332B

    公开(公告)日:2020-11-17

    申请号:CN201610005744.1

    申请日:2016-01-04

    Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体基因突变的方法及其专用引物。通过检测烟碱型乙酰胆碱受体α6亚基基因第十二号外显子区域是否发生9个碱基的缺失突变从而判定待测小菜蛾对多杀霉素的抗性,发生了所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾具有对多杀霉素抗性,未发生所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾不具备对多杀霉素抗性。该方法具有快速简便、准确性高的优点,可用于监测小菜蛾田间种群对多杀霉素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态,为制订小菜蛾化学治理方案提供重要依据,为延缓多杀霉素类杀虫剂抗性发展具有重要意义。

    棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法

    公开(公告)号:CN103014159B

    公开(公告)日:2014-07-02

    申请号:CN201210524000.2

    申请日:2012-12-07

    Abstract: 本发明公开了棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法。该检测方法共分3个主要步骤,第一步:分别提取棉铃虫样品的基因组DNA;第二步:进行特定钙粘蛋白胞质区片段的PCR扩增;第三步:将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测,根据电泳图谱,可以准确鉴定基因型,并以此判断不同种群的抗性基因频率。本发明方法不需饲养试虫,节省劳动力和资源,可以快速、准确检测出棉铃虫的基因型,单个试虫仅需数小时,采集鉴定田间种群的抗性个体频率也只需几周时间,鉴定结果可及时对棉铃虫的有效抗性治理提供正确指导。

    功夫菊酯、辛硫磷混剂
    9.
    发明授权

    公开(公告)号:CN1043119C

    公开(公告)日:1999-04-28

    申请号:CN92114668.X

    申请日:1992-12-23

    Abstract: 本发明涉及一种以功夫菊酯、辛硫磷为有效成分,配以适当的催化剂和溶剂复配而成的农药混剂,主要用于防治棉铃虫,特别是对抗性棉铃虫具有极好的防治效果,可取代目前因抗药性而降低其杀虫效果的氰戊菊酯等菊酯类杀虫剂。由于本发明混剂中各单剂用量明显低于二个单剂分别单独使用的用量,因此可明显降低抗性选择压力,有利于延缓棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂,尤其是对功夫菊酯抗性的反应,所以它是目前防治抗性棉铃虫最理想的混剂。

    检测棉铃虫对有机磷类杀虫剂靶标抗性的方法

    公开(公告)号:CN116555403A

    公开(公告)日:2023-08-08

    申请号:CN202310176803.1

    申请日:2023-02-28

    Abstract: 本发明涉及检测棉铃虫对有机磷类杀虫剂靶标抗性的方法。采用根据棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因设计的特异性引物,以棉铃虫种群成虫后足混合提取的基因组DNA为模板,进行乙酰胆碱酯酶基因片段的带标签PCR扩增,利用Illumina测序平台以PE250测序策略对目标片段纯化产物进行测序,对测序数据依次进行质量控制、标签分选、双端数据拼接、序列比对和单倍型频率分析,可以同时检测多个种群样本的抗性等位基因频率。本发明借助下一代测序技术高通量的特点,对标签化的基因片段进行测序,具有快速简便、准确性高的优点,专用于棉铃虫对有机磷类杀虫剂抗性靶标突变的监测和预警。

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