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公开(公告)号：CN103014159A
公开(公告)日：2013-04-03
申请号：CN201210524000.2
申请日：2012-12-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法。该检测方法共分3个主要步骤，第一步：分别提取棉铃虫样品的基因组DNA；第二步：进行特定钙粘蛋白胞质区片段的PCR扩增；第三步：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳图谱，可以准确鉴定基因型，并以此判断不同种群的抗性基因频率。本发明方法不需饲养试虫，节省劳动力和资源，可以快速、准确检测出棉铃虫的基因型，单个试虫仅需数小时，采集鉴定田间种群的抗性个体频率也只需几周时间，鉴定结果可及时对棉铃虫的有效抗性治理提供正确指导。
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公开(公告)号：CN106939332B
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN201610005744.1
申请日：2016-01-04
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定小菜蛾烟碱型乙酰胆碱受体基因突变的方法及其专用引物。通过检测烟碱型乙酰胆碱受体α6亚基基因第十二号外显子区域是否发生9个碱基的缺失突变从而判定待测小菜蛾对多杀霉素的抗性，发生了所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾具有对多杀霉素抗性，未发生所述的9个碱基的缺失突变的小菜蛾不具备对多杀霉素抗性。该方法具有快速简便、准确性高的优点，可用于监测小菜蛾田间种群对多杀霉素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态，为制订小菜蛾化学治理方案提供重要依据，为延缓多杀霉素类杀虫剂抗性发展具有重要意义。
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公开(公告)号：CN103014159B
公开(公告)日：2014-07-02
申请号：CN201210524000.2
申请日：2012-12-07
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/68
Abstract: 本发明公开了棉铃虫对Cry1Ac毒素非隐性抗性钙粘蛋白胞质区缺失突变的分子检测方法。该检测方法共分3个主要步骤，第一步：分别提取棉铃虫样品的基因组DNA；第二步：进行特定钙粘蛋白胞质区片段的PCR扩增；第三步：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，根据电泳图谱，可以准确鉴定基因型，并以此判断不同种群的抗性基因频率。本发明方法不需饲养试虫，节省劳动力和资源，可以快速、准确检测出棉铃虫的基因型，单个试虫仅需数小时，采集鉴定田间种群的抗性个体频率也只需几周时间，鉴定结果可及时对棉铃虫的有效抗性治理提供正确指导。
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公开(公告)号：CN105713959B
公开(公告)日：2019-04-19
申请号：CN201410720089.9
申请日：2014-12-01
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了小菜蛾对阿维菌素靶标抗性的分子检测方法。采用根据小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因序列设计的特异性引物，以提取的小菜蛾单头基因组DNA为模板，进行谷氨酸氯离子通道基因片段的PCR扩增，分析目标片段纯化产物直接测序色谱图即可区分小菜蛾个体的基因型(敏感纯合子SS、抗性杂合子RS和抗性纯合子RR)，检测种群样本的抗性等位基因突变频率。本发明涵盖小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因A309V突变的检测方法及专用引物序列，该方法具有快速简便、准确性高的优点，可用于监测小菜蛾田间种群对阿维菌素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态，为调整小菜蛾化学防治策略、制订延缓抗性发展措施提供重要依据。
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公开(公告)号：CN105624278B
公开(公告)日：2018-11-23
申请号：CN201410720320.4
申请日：2014-12-01
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道在编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型，一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点，专用于小菜蛾对钠离子通道阻断剂(茚虫威和氰氟虫腙)抗性的监测和预警。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN105624278A
公开(公告)日：2016-06-01
申请号：CN201410720320.4
申请日：2014-12-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了小菜蛾对钠离子通道阻断剂靶标抗性的分子检测方法。该方法利用SEQ ID NO.1所示的特异性正向引物F和SEQ ID NO.2所示的特异性反向引物R对小菜蛾基因组DNA模板进行PCR扩增，对PCR纯化产物直接测序，根据测序色谱图鉴定小菜蛾个体钠离子通道在编码1845和1848位氨基酸的核苷酸是否突变及其具体类型，一次性区分出所述钠离子通道阻断剂抗性靶标的敏感纯合子、抗性杂合子和抗性纯合子。该方法具有快速简便、准确性高的优点，专用于小菜蛾对钠离子通道阻断剂(茚虫威和氰氟虫腙)抗性的监测和预警。
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公开(公告)号：CN116555403A
公开(公告)日：2023-08-08
申请号：CN202310176803.1
申请日：2023-02-28
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6858 , C12N15/11 , C12Q1/6888 , G16B25/20 , G16B20/30 , G16B20/50 , G16B40/00
Abstract: 本发明涉及检测棉铃虫对有机磷类杀虫剂靶标抗性的方法。采用根据棉铃虫乙酰胆碱酯酶基因设计的特异性引物，以棉铃虫种群成虫后足混合提取的基因组DNA为模板，进行乙酰胆碱酯酶基因片段的带标签PCR扩增，利用Illumina测序平台以PE250测序策略对目标片段纯化产物进行测序，对测序数据依次进行质量控制、标签分选、双端数据拼接、序列比对和单倍型频率分析，可以同时检测多个种群样本的抗性等位基因频率。本发明借助下一代测序技术高通量的特点，对标签化的基因片段进行测序，具有快速简便、准确性高的优点，专用于棉铃虫对有机磷类杀虫剂抗性靶标突变的监测和预警。
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公开(公告)号：CN112609008A
公开(公告)日：2021-04-06
申请号：CN202110042966.1
申请日：2021-01-13
Applicant: 南京农业大学
IPC: C12Q1/6888 , C12Q1/6844 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种基于环介导恒温扩增技术LAMP建立一种对绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变的快速检测方法，属于害虫抗药性分子检测和害虫综合防治范畴。本技术旨在解决绿盲蝽乙酰胆碱酯酶A216S突变的快速分子检测，并由此判断绿盲蝽是否对毒死蜱产生抗药性。技术要点包括：提取单头绿盲蝽成虫基因组DNA；设计2对特异性引物；建立LAMP反应体系；明确LAMP反应程序；确定反应结果的颜色判定标准。本方法稳定性好、灵敏度高、用时短、操作简便，可为田间绿盲蝽的抗药性监测和抗药性早期预警提供技术支持，为绿盲蝽的科学防治、合理选药提供准确的判定标准，同时也为植保基层工作者提供简便易行的分子检测手段。
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公开(公告)号：CN110079515A
公开(公告)日：2019-08-02
申请号：CN201910409021.1
申请日：2019-05-16
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了一种棉铃虫中肠丝氨酸蛋白酶基因的原核表达方法。一种棉铃虫中肠丝氨酸蛋白酶基因的原核表达方法，包括以下步骤：提取棉铃虫幼虫中肠的总RNA，克隆棉铃虫中肠蛋白酶基因片段；将棉铃虫中肠蛋白酶基因构建在带有His和Gst双标签的Pet41表达载体上；重组蛋白的表达、纯化、浓缩、标签切除及鉴定。本方法直接表达棉铃虫中肠丝氨酸蛋白酶的成熟肽，避免了表达酶原后对酶原进行体外激活步骤，提高了表达具有生物活性的中肠丝氨酸蛋白酶的成功率。
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公开(公告)号：CN105713959A
公开(公告)日：2016-06-29
申请号：CN201410720089.9
申请日：2014-12-01
Applicant: 南京农业大学
Abstract: 本发明公开了小菜蛾对阿维菌素靶标抗性的分子检测方法。采用根据小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因序列设计的特异性引物，以提取的小菜蛾单头基因组DNA为模板，进行谷氨酸氯离子通道基因片段的PCR扩增，分析目标片段纯化产物直接测序色谱图即可区分小菜蛾个体的基因型(敏感纯合子SS、抗性杂合子RS和抗性纯合子RR)，检测种群样本的抗性等位基因突变频率。本发明涵盖小菜蛾谷氨酸氯离子通道基因A309V突变的检测方法及专用引物序列，该方法具有快速简便、准确性高的优点，可用于监测小菜蛾田间种群对阿维菌素的抗性等位基因频率和抗药性发生发展动态，为调整小菜蛾化学防治策略、制订延缓抗性发展措施提供重要依据。
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